[發明專利]表達重組人凝血因子VII的畢赤酵母及其制法和應用

無效

• 申請號: 200710045279.5
• 申請日: 2007-08-27
• 公開（公告）號: CN101376875A
• 公開（公告）日: 2009-03-04
• 發明（設計）人: 朱威;樓覺人;蔡蓓蓓
• 申請（專利權）人: 上海生物制品研究所
• 主分類號: C12N1/19
• 分類號: C12N1/19;C12N15/12;C12N15/55;C07K14/745;C12N9/74;A61K38/17;A61K38/46;A61P7/04
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司
• 代理人: 徐迅

1.一種表達人凝血因子VII的酵母細胞，其特征在于，所述酵母細胞的染色體中整合有表達人凝血因子VII的構建物，所述構建物含有2-15個串聯排列的人凝血因子VII表達盒，每個所述人凝血因子VII表達盒從5’到3’依次包括以下元件：

(a)起始信號元件AOX；

(b)人凝血因子VII基因；和

(c)終止信號元件AOX(TT)；

并且所述酵母細胞在誘導下表達具有凝血活性的人凝血因子VII。

2.如權利要求1所述的表達人凝血因子VII的酵母細胞，其特征在于，所述酵母細胞選自：畢赤酵母、釀酒酵母、球擬酵母、或漢遜酵母。

3.如權利要求1所述的表達人凝血因子VII的酵母細胞，其特征在于，人凝血因子VII基因包含SEQ?ID?NO：1所示的序列。

4.一種酵母細胞群，其特征在于，所述的細胞群中90-100％的酵母細胞是權利要求1所述的表達人凝血因子VII的酵母細胞，并且90-100％所述酵母細胞中人凝血因子VII表達盒的拷貝數是相同的或基本相同的。

5.一種制備重組人凝血因子VII的方法，其特征在于，所述方法包括步驟：

(i)在適合表達的條件下，培養權利要求1所述的表達重組人凝血因子VII的酵母細胞，從而表達重組人凝血因子VII；和

(ii)從培養物中分離出重組人凝血因子VII。

6.一種重組人凝血因子VII，其特征在于，所述重組凝血因子VII是通過權利要求5所述的方法制備的。

7.如權利要求6所述的重組人凝血因子VII的用途，其特征在于，用于制備促凝血的藥物組合物。

8.一種構建物，其特征在于，所述構建物含有2-15個串聯排列的人凝血因子VII表達盒，每個所述人凝血因子VII表達盒從5’到3’依次包括以下元件：

(a)起始信號元件AOX；

(b)人凝血因子VII基因；和

(c)終止信號元件AOX(TT)。

9.一種構建權利要求8所述的構建物的方法，其特征在于，當所述構建物為多拷貝表達質粒時，所述方法包括：

(1)將人凝血因子VII基因定點插入包含起始信號元件AOX和終止信號元件AOX(TT)的質粒中，以獲得單拷貝表達質粒；

(2)對所述單拷貝表達質粒進行改造以獲得完整的人凝血因子VII表達盒，其中，所述表達盒從5’到3’依次包含以下元件：

(a)起始信號元件AOX；

(b)人凝血因子VII基因；和

(c)終止信號元件AOX(TT)；

(3)將所述人凝血因子VII表達盒重復插入所述質粒中，從而獲得含有2-15個串聯排列的人凝血因子VII表達盒的構建物。

10.一種權利要求1所述的表達人凝血因子VII的酵母細胞的制備方法，其特征在于，所述方法包括步驟：用權利要求5所述的構建物轉化酵母細胞，使所述的構建物整合入酵母染色體中，從而獲得權利要求1所述的表達人凝血因子VII的酵母細胞。