[發明專利]一種消除抗營養因子作用的微生物制劑及制作方法

無效

• 申請號: 200710045097.8
• 申請日: 2007-08-21
• 公開（公告）號: CN101371682A
• 公開（公告）日: 2009-02-25
• 發明（設計）人: 江瀚
• 申請（專利權）人: 上海創博生態工程有限公司
• 主分類號: A23K1/16
• 分類號: A23K1/16
• 代理公司: 上海申匯專利代理有限公司
• 代理人: 翁若瑩

1.一種消除抗營養因子作用的微生物制劑，其特征在于，由以下重量百分比原料組成：枯草芽孢桿菌28—35％、植物乳桿菌45—53％、啤酒酵母菌12—27％

2.根據權利要求1所述的一種消除抗營養因子作用的微生物制劑的制備方法，其特征在于，生產菌種通過射線誘導和生產性能試驗相結合，篩選產量高、產酶量大的生產菌種，生產工藝采用液體單獨培養和固體復合培養技術，培養基中添加產物促進劑，其生產工藝為：

第一步：發酵菌株選育

a.菌株傳代：采用農業部菌種保存中心提供的枯草芽孢桿菌菌株、植物乳桿菌和啤酒酵母菌，通過營養瓊脂培養基傳代培養，選育生長速度快、菌落特征明顯的菌種，在0℃—4℃溫度下保存菌種；

b.將枯草芽孢桿菌菌株、植物乳桿菌和啤酒酵母菌分別在紫外線的照射下進行誘導，將保存的菌種制作菌懸液，稀釋至10^-7，在30cm處用功率為15W的紫外燈，波長為260nm，處理15s—20s，處理后的菌懸液在營養瓊脂平板中溫度為30℃—40℃，倒置培養45小時—50小時，選出生長速度快的菌落進行搖瓶實驗，觀察菌種生長速度，活菌總數大于30億/ml，植物乳桿菌菌落直徑大于3ml，啤酒酵母菌直徑大于7ml，枯草芽孢桿菌直徑大于5ml的菌株在0℃—4℃溫度加以保存；

c.生產性能試驗：將三種菌種接種分別在液體營養瓊脂培養基中培養，培養溫度為35℃—40℃，在轉速為220轉/分—250轉/分的恒溫中進行恒溫培養，24小時—28小時后取樣，利用平板計數法進行菌落總數測定，菌落總數大于30億/ml的菌種可用于生產制種；

d.生產菌種的制作：將篩選出的枯草芽孢桿菌、植物乳桿菌、啤酒酵母菌分別轉接入裝有營養瓊脂培養基的茄子瓶中，在35℃—40℃溫度下培養45小時—50小時，待茄子瓶表面菌苔布滿，并白中帶黃時即可取出，然后放入2—6℃的冰箱中保存；

第二步：復合菌種的液體高速培養

a.按權利要求1的重量百分比稱取各菌種；

b.乳酸菌和啤酒酵母菌的液體培養：將按步驟a的比例稱取的植物乳桿菌和啤酒酵母菌，混合后在一起進行復合培養：將混合菌苔按1：20—25的比例接種于120—128℃、30min—45min高溫滅菌的液體培養基中，在發酵罐中攪拌25min—35min，其轉速為200—220r/min，攪拌均勻后放入消毒后的塑料桶中靜置5—7天，靜置過程中每天測定Ph值并釋放產出的氣體；發酵過程中抽樣3次，顯微鏡下檢測菌體生長情況和測定Ph值，當活菌總數達到40億/ml濃度和Ph值達到3.0-4.0時停止發酵；

c.枯草芽孢桿菌的液體培養：將枯草芽孢桿菌按1：20—25的比例接種于120℃—128℃、30min—45min高溫滅菌的液體培養基中，發酵時通氣量維持在1：1.0-1.2，發酵時間24—35小時；

第三步：菌種的固體擴大培養

a.將步驟2復合培養的菌液混合后按1：20—25的比例接入120℃—128℃、30min—45min高溫滅菌的固體擴大培養基中，在培養基中添加0.08％—0.1％的植酸質作產物促進劑，攪拌30—45min至均勻，倒入消毒雙層飼料袋中密封發酵，溫度32—35℃，時間8—10天；

b、發酵過程中取樣三次，測定水分和Ph值，發酵結束后取樣，測定水分為35％-40％、Ph值為4.5—5.5；

第四步：干燥粉碎：

a.干燥：將步驟3發酵完全的產品按時間先后放入培養箱干燥，溫度控制在40℃—45℃，時間14小時—16小時，干燥完成的物料水份控制在≤12％；

b.過篩：將干燥后的物料通過60—80目的震動篩進行震動，過篩；

c.包裝：將過篩后的物料裝入帶有內袋的桶或袋中，扎緊袋口，系好標識牌，轉入成品庫有序堆放；取樣檢測，主要參數：水份≤12％、活菌數≥50億/g、總蛋白量≥25％；物理性狀：深黃色粉末狀固體。

3.根據權利要求2所述的一種消除抗營養因子作用的微生物制劑的制備方法，其特征在于，所述的步驟2中乳酸菌和啤酒酵母菌的液體培養基組成及重量百分比為：糖蜜12—15％、酵母粉0.2-0.4％、硫酸鎂0.2—0.5％、硫酸銨0.5-0.7％、磷酸氫二鈉0.2-0.5％、尿素0.8-1％、無菌水81.9-86.1％。