[發明專利]天麻多糖或其硫酸化衍生物及其制備方法和應用

無效

• 申請號: 200710044992.8
• 申請日: 2007-08-17
• 公開（公告）號: CN101367879A
• 公開（公告）日: 2009-02-18
• 發明（設計）人: 丁侃;左建平;邱宏;唐煒
• 申請（專利權）人: 中國科學院上海藥物研究所
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61K31/715;A61P31/12
• 代理公司: 北京金信立方知識產權代理有限公司
• 代理人: 朱梅;黃麗娟

技術領域

本發明涉及一種從天麻中提取的天麻多糖，該多糖的硫酸化衍生物，以及從天麻中提取天麻多糖的方法和天麻多糖硫酸化衍生物的制備方法，本發明還涉及天麻多糖硫酸化衍生物在制備治療抗登革熱病毒感染的疾病的藥物中的應用。

背景技術

登革熱是一種熱帶和亞熱帶地區引起人類死亡的主要因素之一。至今仍缺乏專一性強、療效好、毒副作用小的治療藥物。硫酸乙酰肝素蛋白聚糖是一類定位于細胞膜和細胞外基質中糖復合物。定位于細胞膜的硫酸乙酰肝素蛋白聚糖主要有多配體蛋白聚糖(syndecan)和磷脂酰肌醇錨定蛋白聚糖(glypican)兩類。它們的糖鏈在病毒侵染過程中能夠協助病毒進入宿主細胞。外源性的硫酸化多糖能夠有效地阻斷這一過程，比如肝素。由此硫酸化的多糖成為病毒感染開發的一個選擇，最近成為登革熱等病毒感染抑制劑研究的熱點，高活性和低副作用的硫酸化多糖的尋找也就成為該類藥物開發的重點。天麻(Gatrodiaelata?BL.)是一著名的傳統中藥，目前未見其中多糖和多糖衍生物的正式報道。

本發明人從天麻中分離得到天麻多糖(WGESC1A)，通過硫酸化衍生得到的其硫酸化產物(WS45)，WS45具有顯著的抗登革熱病毒活性且在有效劑量下，毒副作用低。

發明內容

因此，本發明的目的在于提供一種從天麻中提取分離出的天麻多糖；

本發明的另一目的在于提供上述天麻多糖的硫酸化衍生物；

本發明的還一目的在于提供一種從天麻中提取天麻多糖的提取方法；

本發明的再一目的在于提供一種制備天麻多糖硫酸化衍生物的方法；

本發明的又一目的是提供天麻多糖硫酸化衍生物作為登革熱病毒抑制劑在制備治療抗登革熱病毒感染的疾病的藥物中的應用。

本發明的天麻多糖，其結構式如下：

α-D-Glcp-(1[→4)-α-D-Glcp-(1]x

???????????????????????↓

???????????????????????6

-{[→4)-α-D-Glcp-(1]y→4-α-D-Glcp-(1→}n-

其中x和y為整數且x+y＝16，n為整數，其峰尖分子量為2.8×10⁵，其在0.5mg/ml水溶液中的比旋度為+95°。

本發明的天麻多糖硫酸化衍生物(WS45)為上述天麻多糖硫酸化衍生物，尤其是在6位羥基上的硫酸化衍生物，其峰尖分子量為1.9×10⁵，其在0.5mg/ml水溶液中的比旋度為+142.8°。

本發明提供從天麻中提取天麻多糖的提取方法，該方法步驟如下：

1)水提粗多糖(WGE)的制備：干燥的天麻飲片，經乙醇脫脂、干燥后，用熱水反復提取2～5次，合并提取液；所得提取液濃縮后用三氯乙酸脫蛋白，離心分離，所得上清液經中和、透析、濃縮，得到一濃縮液；加入2-5倍于濃縮液體積的乙醇，離心分離得沉淀，該沉淀經真空干燥，得水提粗多糖WGE；

2)天麻多糖(WGESC1A)的制備：向上述步驟1)得到的水提粗多糖WGE加入適量水溶解并離心，上清液用二乙基氨乙基纖維素[DEAE-纖維素(Cl^-型)]為載體進行柱層析分離，分別以水、0.1～0.4mol/lNaCl溶液剃度洗脫，其中0.1mol/l?NaCl洗脫液經濃縮、透析以及冷凍干燥得到白色絮狀固體天麻多糖WGESC1A。

更具體而言，在步驟1)中，取天麻干燥飲片，用95wt％乙醇脫脂1周，脫脂后室溫自然干燥；干燥后，用100℃水反復浸漬天麻飲片數次，至提取液用硫酸-苯酚檢測無明顯反應，將每次的提取液合并后加熱濃縮；所得濃縮液冷卻后以15％(W/V)三氯乙酸溶液脫蛋白，離心分離，所得上清液用1mol/l?NaOH中和至pH7.0，然后對流動水透析72h，內液濃縮至小體積，在攪拌下加入三倍體積的95wt％乙醇，靜置過夜，傾去上清液，離心分離，所得沉淀依次用2倍體積的無水乙醇、丙酮洗滌以脫去水分，離心分離，所得沉淀置40℃下真空干燥，得水提粗多糖WGE。