[發明專利]固相多肽合成Exenatide的制備方法

有效

• 申請號: 200710044421.4
• 申請日: 2007-07-31
• 公開（公告）號: CN101357938A
• 公開（公告）日: 2009-02-04
• 發明（設計）人: 周逸明;崔頎
• 申請（專利權）人: 周逸明;崔頎;上海蘇豪逸明制藥有限公司
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;C07K1/04
• 代理公司: 上海世貿專利代理有限責任公司
• 代理人: 葉克英

技術領域

本發明涉及Exenatide的制備方法，尤其涉及固相多肽合成Exenatide的制備方法。

背景技術

中文名：艾賽那肽、醋酸艾賽那肽。

商品名：。英文名：Exenatide?Acetate。

結構式：His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu -Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp(Boc)-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pr o-Pro-Ser-NH₂

分子式為：C₁₈₄H₂₈₂N₅₀O₆₀S

分子量為：4186.6

糖尿病是一種世界性疾病，全世界糖尿病患者已超過1.5億患者，其中II型糖尿病患 者占90％。

在我國II型糖尿病患者將近4000萬，隨著生活水平的提高，發病率將越來越高， 且城市多于農村，由于患者須終生用藥，因此治療II型糖尿病的藥物的市場每年在數百 億人民幣以上。Exenatide是一種治療II型糖尿病的特效新藥，在同類藥物中具有極強 的競爭力。

美國專利6528486報導了制備Exenatide的方法，系采用TentaGel?S-RAM樹脂為 起始原料，用DIC/HOBt或DCC/HOBt為縮合劑，反應時間長，TentaGel?S-RAM樹脂 來源稀缺，價格昂貴(是Rink?Amide?AM樹脂的五倍)；因此該方法限制了Exenatide 的大規模生產和使用。

發明內容

本發明的目的是提供一種固相多肽合成Exenatide的制備方法，以克服現有技術存 在的上述缺陷。

本發明的方法包括如下步驟：

以Rink?Amide樹脂、Rink?Amide?AM樹脂或Rink?Amide?MBHA樹脂為起始原料， 按照固相合成的方法依次連接具有Fmoc保護基團的氨基酸，獲得保護的三十九肽樹脂， 其間依次脫去Fmoc-保護基團，用TBTU/HOBt、HBTU/HOBt、BOP/HOBt、TBTU/HOAt、 HBTU/HOAt或BOP/HOAt中的任何一種為縮合劑，進行接肽反應，得保護的三十九肽 樹脂后，同步進行脫側鏈保護基團及切肽，獲得Exenatide粗品，并經C18(或C8)柱 進行分離純化，獲得所說的Exenatide，然后可再經冷凍干燥，獲得產品，包括：醋酸鹽、 三氟醋酸鹽等醫學上可用的鹽及游離堿。

按照本發明，優選的，依次連接具有Fmoc保護基團的氨基酸，獲得保護的三十九 肽樹脂，依次包括如下步驟：

(1)將Rink?Amide樹脂、Rink?Amide?AM樹脂或Rink?Amide?MBHA樹脂用DMF 或DCM浸泡10～60分鐘，使樹脂溶脹，樹脂的重量體積濃度為5～20ml/g；

(2)在上述的樹脂中，加入脫帽試劑，進行脫帽反應，然后樹脂用DMF洗滌， 抽干，加入用接肽試劑溶解的具有Fmoc保護基團的氨基酸、TBTU/HOBt、HBTU/HOBt 或BOP/HOBt的混合物，10～60℃接肽反應0.5～5小時，抽干，分別用DMF、甲醇、DMF 洗滌，抽干，然后再加入脫帽試劑，脫帽反應，再加入用接肽試劑溶解的具有Fmoc保 護基團的氨基酸，如此重復，獲得：

Fmoc-Gly-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Leu-Ser(tBu)-Lys(B oc)-Gln(Trt)-Met-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtB u)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-S er(tBu)-樹脂；

所說的具有Fmoc保護基團的氨基酸，依次包括：