[發明專利]固相多肽合成Exenatide的制備方法

有效

• 申請號: 200710044421.4
• 申請日: 2007-07-31
• 公開（公告）號: CN101357938A
• 公開（公告）日: 2009-02-04
• 發明（設計）人: 周逸明;崔頎
• 申請（專利權）人: 周逸明;崔頎;上海蘇豪逸明制藥有限公司
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;C07K1/04
• 代理公司: 上海世貿專利代理有限責任公司
• 代理人: 葉克英

1.一種固相多肽合成Exenatide的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）制備Fmoc-Ser(tBu)-樹脂

稱取Rink?Amide?MBHA樹脂100克，裝入SHYM-25多肽合成儀中，用1000mlDMF浸泡30分鐘，加入Fmoc-Ser(tBu)-OH?58g，HBTU?58g，HOBT?21g，用1000ml接肽試劑溶解，25℃反應1小時，抽干，分別用DMF、甲醇、DMF洗滌數次，抽干；

（2）制備Fmoc-Pro-Ser(tBu)-樹脂

在步驟（1）的Fmoc-Ser(tBu)-樹脂中，加入脫帽試劑800ml，25℃反應30分鐘，抽干，用DMF、甲醇、DMF各洗滌數次，抽干，加入Fmoc-Pro-OH?52g、HBTU?58g、HOBT?21g，用1000ml接肽試劑溶解混合物，25℃反應1小時，抽干，分別用DMF、甲醇、DMF洗滌數次抽干，獲得Fmoc-Pro-Ser(tBu)-樹脂；

（3）制備Fmoc-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂

在步驟（2）的Fmoc-Pro-Ser(tBu)-樹脂中，加入脫帽試劑?800ml，25℃反應30分鐘，抽干，用DMF洗滌，抽干，加入Fmoc-Pro-OH?52g、HBTU?58g，HOBT?21g，用1000ml接肽試劑溶解混合物，25℃反應1小時，抽干，分別用DMF、甲醇、DMF洗滌數次，抽干，獲得Fmoc-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂；

Fmoc-Pro-OH的摩爾數為樹脂的2~5倍；

（4）制備Fmoc-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂

在步驟（3）的Fmoc-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂中，加入800ml脫帽試劑，25℃反應30分鐘，抽干，用DMF洗滌，抽干，加入Fmoc-Pro-OH?52g、HBTU?58g，HOBT?21g，用1000ml接肽試劑溶解的混合物，25℃反應1小時，抽干，分別用DMF、甲醇、DMF洗滌數次，抽干，獲得Fmoc-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂；

Fmoc-Pro-OH的摩爾數為樹脂的2~5倍；

（5）制備Fmoc-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂

在步驟（4）的Fmoc-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂中，加入800ml脫帽試劑，反應，抽干，用DMF洗滌，抽干，加入Fmoc-Ala-OH?48g、HBTU?58g，HOBT?21g，用1000ml接肽試劑溶解混合物，25℃反應1小時，抽干，分別用DMF、甲醇、DMF洗滌數次，抽干，獲得Fmoc-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂；

Fmoc-Ala-OH的摩爾數為樹脂的2~5倍；

（6）制備Fmoc-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂

在步驟（5）的Fmoc-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂中，加入800ml脫帽試劑，反應，抽干，用DMF洗滌，抽干，加入Fmoc-Gly-OH?46g、HBTU?58g，HOBT?21g，用1000ml接肽試劑溶解混合物，25℃反應1小時，抽干，分別用DMF、甲醇、DMF洗滌數次，抽干，獲得Fmoc-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂；

（7）制備Fmoc-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂

在步驟（6）的Fmoc-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂中，加入800ml脫帽試劑，反應，抽干，用DMF洗滌，抽干，加入Fmoc-Ser(tBu)-OH?58g、HBTU?58g，HOBT?21g，用1000ml接肽試劑溶解混合物，25℃反應1小時，抽干，分別用DMF、甲醇、DMF洗滌數次，抽干，抽干，獲得Fmoc-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂；

（8）制備Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂

在步驟（7）的Fmoc-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂中，加入800ml脫帽試劑，反應，抽干，用DMF洗滌，抽干，加入Fmoc-Ser(tBu)-OH?58g、HBTU?58g，HOBT?21g，用1000ml接肽試劑溶解混合物，25℃反應1小時，抽干，分別用DMF、甲醇、DMF洗滌數次，抽干，抽干，獲得Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-?Pro-Ser(tBu)-樹脂；

（9）制備Fmoc-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂

在步驟（8）的Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂中，加入800ml脫帽試劑，反應，抽干，用DMF洗滌，抽干，加入Fmoc-Pro-OH?52g、HBTU?58g，HOBT?21g，用1000ml接肽試劑溶解混合物，25℃反應1小時，抽干，分別用DMF、甲醇、DMF洗滌數次，抽干，獲得Fmoc-Pro-Ser(tBu)?-Ser(tBu)-Gly-Ala-?Pro?-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂；

（10）制備Fmoc-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂

在步驟（9）的Fmoc-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂中，加入800ml脫帽試劑，反應，抽干，用DMF洗滌，抽干，加入Fmoc-Gly-OH?46g、HBTU?58g，HOBT?21g，用1000ml接肽試劑溶解混合物，25℃反應1小時，抽干，分別用DMF、甲醇、DMF洗滌數次，抽干，獲得Fmoc-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-?Pro-Ser(tBu)-樹脂；

（11）制備Fmoc-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂

在步驟（10）的Fmoc-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly?-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂中，加入800ml脫帽試劑，反應，抽干，用DMF洗滌，抽干，加入Fmoc-Gly-OH?46g、HBTU?58g，HOBT?21g，用1000ml接肽試劑溶解混合物，25℃反應1小時，抽干，分別用DMF、甲醇、DMF洗滌數次，抽干，獲得Fmoc-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala?-Pro-Pro?-Pro-Ser?(tBu)-樹脂；

（12）制備Fmoc-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-?Ser?(tBu)-樹脂

在步驟（11）的Fmoc-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)?-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂中，加入800ml脫帽試劑，反應，抽干，用DMF洗滌，抽干，加入Fmoc-Asn(Trt)-OH?90g、HBTU?58g，HOBT?21g，用1000ml接肽試劑溶解混合物，25℃反應1小時，抽干，分別用DMF、甲醇、DMF洗滌數次，抽干，獲得Fmoc-Asn(Trt)-Gly-Gly?-Pro?-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-?Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂；

（13）制備Fmoc-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro?–Pro?-Ser(tBu)-樹脂

在步驟（12）的Fmoc-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-?Ser(tBu)-樹脂中，加入800ml脫帽試劑，反應，抽干，用DMF洗滌，抽干，加入Fmoc-Lys(Boc)-OH?72g、HBTU?58g，HOBT?21g，用1000ml接肽試劑溶解混合物，25℃反應1小時，抽干，分別用DMF、甲醇、DMF洗滌數次，抽干，獲得Fmoc-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂；

（14）制備Fmoc-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro?-Pro?-Pro-Ser(tBu)-樹脂

在步驟（13）的Fmoc-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)?-Gly-Ala-Pro?-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂中，加入800ml脫帽試劑，反應，抽干，用DMF洗滌，抽干，加入Fmoc-Leu-OH?54g、HBTU?58g，HOBT?21g，用1000ml接肽試劑溶解混合物，25℃反應1小時，抽干，分別用DMF、甲醇、DMF洗滌數次，抽干，獲得Fmoc-Leu-?Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro?-Pro-Ser?(tBu)-樹脂；

（15）制備Fmoc-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-?Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂

在步驟（14）的Fmoc-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly?-Ala?-Pro-Pro?-Pro-Ser(tBu)-樹脂中，加入800ml脫帽試劑，反應，抽干，用DMF洗滌，抽干，加入Fmoc-Trp(Boc)-OH?64g、HBTU??58g，HOBT?21g，用1000ml接肽試劑溶解混合物，25℃反應1小時，抽干，分別用DMF、甲醇、DMF洗滌數次，抽干，獲得Fmoc-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro?-Pro?-?Ser(tBu)-樹脂；

（16）制備Fmoc-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser?(tBu)?-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂

在步驟（15）的Fmoc-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)?-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂中，加入800ml脫帽試劑，反應，抽干，用DMF洗滌，抽干，加入Fmoc-Glu(OtBu)-OH?64g、HBTU?58g，HOBT?21g，用1000ml接肽試劑溶解混合物，25℃反應1小時，抽干，分別用DMF、甲醇、DMF洗滌數次，抽干，獲得Fmoc-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-?Ala?-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂；

（17）制備Fmoc-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-?Ser?(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂

在步驟（16）的Fmoc-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser?(tBu)?-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂中，加入800ml脫帽試劑，反應，抽干，用DMF洗滌，抽干，加入Fmoc-Ile-OH?54g、HBTU?58g，HOBT?21g，用1000ml接肽試劑溶解混合物，25℃反應1小時，抽干，分別用DMF、甲醇、DMF洗滌數次，抽干，獲得Fmoc-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-?Gly?-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂；

（18）制備Fmoc-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro?-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂

在步驟（17）的Fmoc-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly?–Pro?-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂中，加入800ml脫帽試劑，反應，抽干，用DMF洗滌，抽干，加入Fmoc-Phe-OH?58g、HBTU?58g，HOBT?21g，用1000ml接肽試劑溶解混合物，25℃反應1小時，抽干，分別用DMF、甲醇、DMF洗滌數次，抽干，獲得Fmoc-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-?Asn(Trt)-Gly-?Gly-Pro-Ser?(tBu)?-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂；

（19）制備Fmoc-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-?Pro?-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂

在步驟（18）的Fmoc-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)?-Gly-Gly-?Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂中，加入800ml脫帽試劑，反應，抽干，用DMF洗滌，抽干，加入Fmoc-Leu-OH?54g、HBTU?58g，HOBT?21g，用1000ml接肽試劑溶解混合物，25℃反應1小時，抽干，分別用DMF、甲醇、DMF洗滌數次，抽干，獲得Fmoc-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-?Gly-Pro-?Ser(tBu)?-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂；

（20）制備Fmoc-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly?-Gly?-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂

在步驟（19）的Fmoc-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)?-Gly?-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂中，加入800ml脫帽試劑，反應，抽干，用DMF洗滌，抽干，加入Fmoc-Arg(Pbf)-OH?98g、HBTU?58g，HOBT?21g，用1000ml接肽試劑溶解混合物，25℃反應1小時，抽干，分別用DMF、甲醇、DMF洗滌數次，抽干，獲得Fmoc-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-?Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro?-?Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂；

（21）制備Fmoc-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)?-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂

在步驟（20）的Fmoc-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)?-Asn?(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂中，加入800ml脫帽試劑，反應，抽干，用DMF洗滌，抽干，加入Fmoc-Val-OH?52g、HBTU?58g，HOBT???21g，用1000ml接肽試劑溶解混合物，25℃反應1小時，抽干，分別用DMF、甲醇、DMF洗滌數次，抽干，獲得Fmoc-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-?Lys(Boc)?-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-?Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂；

（22）制備Fmoc-Ala-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-?Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂

在步驟（21）的Fmoc-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys?(Boc)?-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂中，加入800ml脫帽試劑，反應，抽干，用DMF洗滌，抽干，加入Fmoc-Ala-OH?48g、HBTU?58g，HOBT?21g，用1000ml接肽試劑溶解混合物，25℃反應1小時，抽干，分別用DMF、甲醇、DMF洗滌數次，抽干，獲得Fmoc-Ala-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp?(Boc)-Leu-Lys?(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro?-Pro-Pro-?Ser?(tBu)-樹脂；

（23）制備Fmoc-Glu(OtBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-?Lys(Boc)?-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂

在步驟（22）的Fmoc-Ala-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)?-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂中，加入800ml脫帽試劑，反應，抽干，用DMF洗滌，抽干，加入Fmoc-Glu(OtBu)-OH?64g、HBTU?58g，HOBT?21g，用1000ml接肽試劑溶解混合物，25℃反應1小時，抽干，分別用DMF、甲醇、DMF洗滌數次，抽干，獲得Fmoc-Glu(OtBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)-?Leu-Phe-Ile?-Glu(OtBu)-Trp(Boc)?-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-?Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂；

（24）制備Fmoc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)?-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂

在步驟（23）的Fmoc-Glu(OtBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)?-Trp(Boc)?-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂中，加入800ml脫帽試劑，反應，抽干，用DMF洗滌，抽干，加入Fmoc-Glu(OtBu)-OH?64g、HBTU?58g，HOBT?21g，用1000ml接肽試劑溶解混合物，25℃反應1小時，抽干，分別用DMF、甲醇、DMF洗滌數次，抽干，獲得Fmoc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)?-Ala-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂；

（25）制備Fmoc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu?(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂

在步驟（24）的Fmoc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)-?Leu-Phe?-Ile-Glu(OtBu)?-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂中，加入800ml脫帽試劑，反應，抽干，用DMF洗滌，抽干，加入Fmoc-Glu(OtBu)-OH?64g、HBTU?58g，HOBT?21g，用1000ml接肽試劑溶解混合物，25℃反應1小時，抽干，分別用DMF、甲醇、DMF洗滌數次，抽干，獲得Fmoc-Glu(OtBu)?-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-?Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂；

（26）制備Fmoc-Met-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile?–Glu?(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂

在步驟（25）的Fmoc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe?-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂中，加入800ml脫帽試劑，反應，抽干，用DMF洗滌，抽干，加入Fmoc-Met-OH?56g、HBTU?58g，HOBT?21g，用1000ml接肽試劑溶解混合物，25℃反應1小時，抽干，分別用DMF、甲醇、DMF洗滌數次，抽干，獲得Fmoc-Met?-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)?-Glu(OtBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)?-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu?-Lys(Boc)-Asn(Trt)-?Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂；

（27）制備Fmoc-Gln(Trt)-Met-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Leu?-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂

在步驟（26）的Fmoc-Met-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Leu?-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂中，加入800ml脫帽試劑，反應，抽干，用DMF洗滌，抽干，加入Fmoc-Gln(Trt)-OH?92g、HBTU?58g，HOBT?21g，用1000ml接肽試劑溶解混合物，25℃反應1小時，抽干，分別用DMF、甲醇、DMF洗滌數次，抽干，獲得Fmoc-Gln(Trt)?-Met-Glu(OtBu)?-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile?-Glu(OtBu)-Trp(Boc)?-Leu-Lys(Boc)?-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-?Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala?-Pro?-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂；

（28）制備Fmoc-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Met-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Val-?Arg?(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂

在步驟（27）的Fmoc-Gln(Trt)-Met-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)?-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂中，加入800ml脫帽試劑，反應，抽干，用DMF洗滌，抽干，加入Fmoc-Lys(Boc)-OH72g、HBTU?58g，HOBT?21g，用1000ml接肽試劑溶解混合物，25℃反應1小時，抽干，分別用DMF、甲醇、DMF洗滌數次，抽干，獲得Fmoc-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Met-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Leu-?Phe?-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-?Pro?-?Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂；

（29）制備Fmoc-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Met-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-?Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)?-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂

在步驟（28）的Fmoc-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Met-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala?-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂中，加入800ml脫帽試劑，反應，抽干，用DMF洗滌，抽干，加入Fmoc-Ser(tBu)-OH?58g、HBTU?58g，HOBT?21g，用1000ml接肽試劑溶解混合物，25℃反應1小時，抽干，分別用DMF洗滌數次，抽干，獲得Fmoc-Ser(tBu)-Lys(Boc)?-Gln(Trt)-Met-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)-?Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂；

（30）制備Fmoc-Leu-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Met-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-?Ala-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂

在步驟（29）的Fmoc-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Met-Glu(OtBu)-Glu?(OtBu)-Glu(OtBu)?-Ala-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂中，加入800ml脫帽試劑，反應，抽干，用DMF洗滌，抽干，加入Fmoc-Leu-OH?54g、HBTU?58g，HOBT?21g，用1000ml接肽試劑溶解混合物，25℃反應1小時，抽干，分別用DMF、甲醇、DMF洗滌數次，抽干，獲得Fmoc-Leu-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Met-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Val?-Arg(Pbf)?-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-?Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂；

（31）制備Fmoc-Asp(OtBu)-Leu-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Met-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)?-Glu(OtBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂

在步驟（30）的Fmoc-Leu-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Met-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-?Glu(OtBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂中，加入800ml脫帽試劑，反應，抽干，用DMF洗滌，抽干，加入Fmoc-Asp(OtBu)-OH?62g、HBTU?58g，HOBT?21g，用1000ml接肽試劑溶解混合物，25℃反應1小時，抽干，分別用DMF、甲醇、DMF洗滌數次，抽干，獲得Fmoc-Asp(OtBu)-Leu-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)?-Met-Glu(OtBu)-?Glu?(OtBu)-?Glu?(OtBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-?Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂；

（32）制備Fmoc-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Leu-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Met-Glu(OtBu)?-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂

在步驟（31）的Fmoc-Asp(OtBu)-Leu-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Met-Glu(OtBu)?-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂中，加入800ml脫帽試劑，反應，抽干，用DMF洗滌，抽干，加入Fmoc-Ser(tBu)-OH?58g、HBTU?58g，HOBT?21g，用1000ml接肽試劑溶解混合物，25℃反應1小時，抽干，分別用DMF、甲醇、DMF洗滌數次，抽干，獲得Fmoc-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Leu-Ser(tBu)?-Lys(Boc)?-Gln(Trt)-Met?-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-?Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂；

（33）制備Fmoc-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Leu-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Met-?Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂

在步驟（32）的Fmoc-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Leu-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Met?-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂中，加入800ml脫帽試劑，反應，抽干，用DMF洗滌，抽干，加入Fmoc-Thr(tBu)-OH?60g、HBTU?58g，HOBT?21g，用1000ml接肽試劑溶解混合物，25℃反應1小時，抽干，分別用DMF、甲醇、DMF洗滌數次，抽干，獲得Fmoc-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-?Leu-Ser(tBu)?-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Met-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)-?Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂；

（34）制備Fmoc-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Leu-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Met?-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂

在步驟（33）的Fmoc-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Leu-Ser(tBu)-Lys?(Boc)-Gln(Trt)?-Met-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂中，加入800ml脫帽試劑，反應，抽干，用DMF洗滌，抽干，加入Fmoc-Phe-OH?58g、HBTU?58g，HOBT?21g，用1000ml接肽試劑溶解混合物，25℃反應1小時，抽干，分別用DMF、甲醇、DMF洗滌數次，抽干，獲得Fmoc-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Leu?-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)?-Met-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)-?Leu-?Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂；

（35）制備Fmoc-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Leu-Ser(tBu)-Lys(Boc)-?Gln?(Trt)-Met-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂

在步驟（34）的Fmoc-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Leu-Ser(tBu)-Lys(Boc)-?Gln(Trt)-Met-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂中，加入800ml脫帽試劑，反應，抽干，用DMF洗滌，抽干，加入Fmoc-Thr?(tBu)-OH?60g、HBTU?58g，HOBT?21g，用1000ml接肽試劑溶解混合物，25℃反應1小時，抽干，分別用DMF、甲醇、DMF洗滌數次，抽干，獲得Fmoc-Thr(tBu)?-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)?-Asp(OtBu)?-Leu-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Met-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-?Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂；

（36）制備Fmoc-Gly-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Leu-Ser(tBu)-Lys(Boc)?-Gln(Trt)-Met-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂

在步驟（35）的Fmoc-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Leu-Ser?(tBu)-?Lys(Boc)-Gln(Trt)-Met-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂中，加入800ml脫帽試劑，反應，抽干，用DMF洗滌，抽干，加入Fmoc-Gly-OH?46g、HBTU?58g，HOBT?21g，用1000ml接肽試劑溶解混合物，25℃反應1小時，抽干，分別用DMF、甲醇、DMF洗滌數次，抽干，獲得Fmoc-Gly-Thr(tBu)?-Phe-Thr?(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Leu-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Met-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-?Glu?(OtBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂；

（37）制備Fmoc-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Leu-Ser(tBu)?-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Met-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂

在步驟（36）的Fmoc-Gly-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-?Leu-Ser(tBu)-?Lys(Boc)-Gln(Trt)-Met-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂中，加入800ml脫帽試劑，反應，抽干，用DMF洗滌，抽干，加入Fmoc-Glu(OtBu)-OH?64g、HBTU?58g，HOBT?21g，用1000ml接肽試劑溶解混合物，25℃反應1小時，抽干，分別用DMF、甲醇、DMF洗滌數次，抽干，獲得Fmoc-Glu(OtBu)-Gly?-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Leu-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Met-?Glu?(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂；

（38）制備Fmoc-Gly-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp?(OtBu)-Leu?-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Met-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂

在步驟（37）的Fmoc-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)?-Leu-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Met-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂中，加入800ml脫帽試劑，反應，抽干，用DMF洗滌，抽干，加入Fmoc-Gly-OH?46g、HBTU?58g，HOBT?21g，用1000ml接肽試劑溶解混合物，25℃反應1小時，抽干，分別用DMF、甲醇、DMF洗滌數次，抽干，獲得Fmoc-Gly-Glu(OtBu)-Gly?-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Leu-Ser(tBu)-Lys?(Boc)?-Gln(Trt)-Met-Glu?(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-?Ile-?Glu(OtBu)?-Trp(Boc)-Leu-Lys?(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-?Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂；

（39）制備Fmoc-His(Trt)-Gly-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)?-Asp(OtBu)?-Leu-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Met-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂

在步驟（38）的Fmoc-Gly-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)?-Leu-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Met-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-樹脂中，加入預冷至0℃的切肽試劑：TFA/EDT/H2O/TIS＝1260ml/56ml/35ml/14ml，25℃反應3小時，減壓除溶劑后，加入1500ml乙醚沉淀，收集沉淀物，用乙醚洗，在室溫，置干燥器中，P₂O₅存在下減壓干燥12小時，獲得切肽后的Exenatide粗品，100g；

將Exenatide粗品溶于重量濃度為5%乙酸中，過濾，濾液經C18柱純化，流動相：0.2M醋酸鹽緩沖液∶乙腈為7.5∶2.5，體積比；流速為350ml/min；檢測波長為：280nm；用液相色譜儀跟蹤收集所需要的流出液，樣品峰合并后去鹽，凍干，獲得產品12.2g，總收率為9.7%；

所說的接肽試劑為：NMM：DMF=1：5~15，體積比；

所說的脫帽試劑為：PIP：DMF=1：2~5，體積比。