[發明專利]一種同時測定水果中多種有機酸含量的方法

無效

• 申請號: 200710044252.4
• 申請日: 2007-07-26
• 公開（公告）號: CN101101284A
• 公開（公告）日: 2008-01-09
• 發明（設計）人: 張晉芬;袁冰;徐華龍;沈偉
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/26
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司
• 代理人: 滕懷流

技術領域

本發明涉及水果有機酸的含量測定方法，使用通常的高效液相色譜儀特定的色譜條件，就可以完成水果中草酸、酒石酸、維生素C、蘋果酸、乳酸、檸檬酸、富馬酸、琥珀酸等有機酸的測定，得到準確的結果。

背景技術

水果中的有機酸的分析方法主要有：酸堿滴定法、薄層色譜法、氣相色譜法(GC)、離子色譜法(HPIC)及高效液相色譜法等。酸堿滴定法只能測定總酸量，且操作繁瑣；薄層色譜法定量精度差；氣相色譜法常因酸的沸點較高不宜氣化而需衍生步驟，誤差較大，方法繁瑣；離子色譜法是近年來應用較多的測定植物體有機酸的方法，可同時測定溶液中有機酸根離子和無機陰離子，但大量無機陰離子的存在通常增加了低含量有機酸檢測難度。

測定維生素C的方法主要有2，6-二氯靛酚鈉鹽滴定法、2，4-二硝基苯肼比色法、熒光分光光度法等。由于維生素C有較強的還原性，在中性和堿性條件下不穩定，遇熱容易被破壞，因而上述方法靈敏度低、操作繁瑣費時，測定值往往偏低。

有機酸是水果中主要風味營養物質之一，其含量高低與水果品質有密切聯系。用高效液相色譜法測定水果中有機酸雖然操作簡便、準確度高、重現性好，也可同時定量測定多種有機酸，但是時間偏長，降低了效率。

發明內容

本發明的目的是提供一種操作簡單、準確性好、效率高的水果中有機酸同時測定的方法。

本發明同時測定水果中有機酸含量的高效液相色譜法包括下述步驟：

1.分別用流動相水相作溶劑制備待測有機酸不同濃度梯度的標準溶液；

2.制備待測樣品：選果-削皮-切片-榨汁-過濾。所得果汁用流動相水相制備果汁質量濃度為0.1～1.0g/L的待測液，在定容時向體系中加入Carrez(卡瑞)試劑I和II各0.05～0.25ml進行凈化處理。搖勻、靜置；

3.使用包括四元泵(可梯度洗脫即可)、恒溫箱、紫外檢測器以及工作站所組成的HPLC儀。在反相鍵合色譜柱上，以甲醇/磷酸二氫鈉-磷酸緩沖液為其流動相梯度洗脫分離草酸、酒石酸、維生素C、蘋果酸、乳酸、檸檬酸、富馬酸、琥珀酸。

色譜條件如下：

分析柱：反相鍵合硅膠色譜柱；

流動相：甲醇/0.01mol/L磷酸二氫鈉-磷酸緩沖液，pH＝2.6～3.2；

流速：0.4～1.0ml/min；

洗脫方式：梯度洗脫；

檢測：UV?200～280nm；

溫度：20～35℃；

進樣體積：15.0～25.0μL；

分別取0.20μm或0.45μm針頭過濾后的20μL(定量環)系列標準溶液進行譜圖及回歸曲線的測定。經處理后的待測樣品用0.20μm或0.45μm針頭過濾后進樣，在上述色譜條件下測定有機酸含量。

4.依據色譜峰面積，利用外標法由各標準溶液的回歸方程計算樣品中各有機酸的含量。

本發明中洗脫梯度為流動相A和流動相B在0～8min內體積比在1.5∶98.5～10∶90梯度范圍。本發明中待測樣品的制備時使用Carrez試劑即卡瑞試劑作為樣品凈化劑。本發明中反向鍵合色譜柱為C₈或C₁₈硅膠色譜柱，當反相鍵合色譜柱為C₈硅膠色譜柱時，本發明能在8min內完成對一個水果樣品注射液的定量檢測。本發明中用外標法計算有機酸的含量。本發明中測定的有機酸為草酸、酒石酸、維生素C、蘋果酸、乳酸、檸檬酸、富馬酸或琥珀酸。本發明中水果是梨、蘋果、草莓或油桃。

本發明采用了Carrez試劑即卡瑞試劑作為樣品凈化劑處理樣品不僅可達到凈化樣品、保護色譜柱的目的，同時測量精度和回收率都不同程度得到提高。

液體維生素C具有較強的還原性，易受空氣、熱、光等因素影響，通常用研磨法制樣，用水定容的方法往往在有機酸的測定中不能測定出維生素C。本發明采用榨汁法制樣，用流動相水相定容，從而實現了維生素C的檢測，且效果良好。

本發明分別獲得了對同時測定水果中多種有機酸含量的高效液相色譜法有重要影響的幾個條件：檢測波長、溫度、樣品溶劑、流動相配比和流速及洗脫梯度等，并考察了水果有機酸的回歸方程、相關系數、最小檢出限，及本發明方法的精密度與回收率。其中，回收率是向已知濃度樣品中加入一定量標準溶液，按相同色譜條件及實驗方法測定，利用增量法計算回收率。同一個水果樣品平行測定三次，所得結果相對標準偏差在4％以內，方法的回收率在91.48％～101.50％之間，因此本發明還具有準確度高，重現性好的優點。