[發明專利]核磁共振血栓靶向對比劑及其制備方法

有效

• 申請號: 200710044042.5
• 申請日: 2007-07-20
• 公開（公告）號: CN101347625A
• 公開（公告）日: 2009-01-21
• 發明（設計）人: 周同;王學鋒;鐘高仁
• 申請（專利權）人: 上海交通大學醫學院附屬瑞金醫院
• 主分類號: A61K49/06
• 分類號: A61K49/06
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司
• 代理人: 薛琦

技術領域

本發明涉及一種核磁共振靶向對比劑，特別涉及一種基于單克隆抗體的核磁共振血栓靶向對比劑及其制備方法。

背景技術

血栓性疾病是一種嚴重危害人類生命和健康的血液回流障礙性疾病，包括動脈血栓與靜脈血栓性疾病，涉及臨床各科尤見心、腦血管血栓性栓塞、深靜脈血栓形成、肺栓塞的并發癥以及外周動脈閉塞性疾病，且發病率、死亡率與致殘率均高。

目前臨床上對于血栓性疾病的影像診斷主要依賴于血管造影、多普勒超聲、放射性核素血管造影等技術。但是上述技術存在需注入造影劑、放射性核素或者假陽性率高等缺點，且當血栓得到確診時患者一般均已出現臨床癥狀，或者不可逆的器質性改變。而核磁共振成像(magnetic?resonance?imaging，MRI)是一種完全無創的影像學診斷方法，但核磁共振(MR)檢查血栓采用普通對比劑如順磁性對比劑二乙三胺五乙酸釓(Gd-DTPA)等，不能使早期血栓得到特異性增強。因此，血栓的早期診斷受到限制，以至不易掌握最佳溶栓的治療時間，進而影響其治療效果，總之目前尚缺乏血栓早期特異診斷方法。

現有研究證實，P-選擇素參與免疫炎癥損傷、血栓形成及腫瘤轉移等多種病理生理過程。在本申請人的專利號為ZL200310108522.5的中國專利中，公開了針對P-選擇素lectin-EGF(L-EGF)功能域的鼠源單克隆抗體(PsL-EGFmAb)及其制備方法(包括雜交瘤細胞)和應用。試驗數據表明PsL-EGF?mAb較P-選擇素全長單抗更具有抗黏附/抗炎靶向抑制效應。之后，本申請人又成功地制得針對該功能域的人源單抗(參見申請號為CN20061的專利申請)。為進一步研究抗PsL-EGF功能域單抗在診斷和治療血栓性疾病中的應用提供了基礎。

發明內容

本發明要解決的技術問題即是提供一種基于PsL-EGFmAb的核磁共振血栓靶向對比劑及其制備方法。

本發明人選用目前應用最廣泛的MR對比劑Gd-DTPA進行研究，其是一種順磁性T1加權陽性對比劑(結構式如下式I所示)，具有親水性、分子量小的特點，注入血管后迅速向周圍組織間隙分布，由腎臟排泄，即使腎功能有損害，它也能經腎排除。Gd-DTPA不具有組織或器官的選擇性，故如果要作為靶向的對比劑，即需要連接特異性的抗體。

本發明人經研究發現，由于DTPA(分子質量393.36)結合數量增加對抗體具有一定的空間位阻效應，經DTPA修飾的抗體免疫活性隨著DTPA結合量的增加而降低，當DTPA連接數量>30個后，其免疫活性較單抗的免疫活性下降程度顯著。而Gd-DTPA的連接數量又直接決定了對比劑的對比度，當Gd-DTPA連接數量<30個后，其相對對比度已經很低不能達到肉眼明顯區分的目的。使用Gd-DTPA直接連接抗體不能同時滿足具備相應的免疫結合力和MR成像對比度的要求，并非最佳的對比劑結合方式。本發明人經過進一步的研究發現，將PsL-EGFmAb通過大分子物質如血清白蛋白，特別是牛血清白蛋白(BSA)與含順磁性物質Gd-DTPA連接，制備了具有P-選擇素靶特異性的核磁共振對比劑(Gd-DTPA)_n-BSA-PsL-EGFmAb，進行了體外MR成像結果顯示，該對比劑可明顯增強模擬血小板血栓及全血血栓的MR成像信號，同時亦能增強離體受損血管內膜的成像信號。在此基礎上，本發明人制備了犬股靜脈血栓模型，利用(Gd-DTPA)_n-BSA-PsL-EGFmAb進行體內活體MR分子成像，結果表明該對比劑可早期顯影和定位血栓，且能明顯提高血栓的MR信號強度和信噪比。

因此，本發明提供的一種核磁共振血栓靶向對比劑，其是由抗人P-選擇素凝集素-表皮生長因子功能域單克隆抗體與二乙三胺五乙酸釓-血清白蛋白偶聯而成的大分子多聚體。

根據本發明，所述的二乙三胺五乙酸釓-血清白蛋白優選二乙三胺五乙酸釓-牛血清白蛋白，得到的對比劑為(Gd-DTPA)_n-BSA-PsL-EGFmAb，其中n＝70～100。本發明利用BSA放大系統，可使一分子多聚體對比劑、即一分子PsL-EGFmAb上載帶有70～100個Gd³⁺時，可增強對比劑效果，并保持了單抗較佳的免疫結合力。