[發(fā)明專利]體外篩選胰高血糖素樣肽－1受體的多肽類激動劑的方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 200710042364.6 | 申請日： | 2007-06-21 |
| 公開（公告）號： | CN101113982A | 公開（公告）日： | 2008-01-30 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 魏東芝;馬昱澍;殷曉浦;劉美云 | 申請（專利權(quán)）人： | 華東理工大學(xué) |
| 主分類號： | G01N33/68 | 分類號： | G01N33/68;G01N33/566;A61K38/26;A61P3/10 |
| 代理公司： | 上海光華專利事務(wù)所 | 代理人： | 余明偉;許亦琳 |
| 地址： | 200237*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 體外 篩選 血糖 素樣肽 受體 多肽 激動劑 方法 | ||
1.一種體外篩選胰高血糖素樣肽-1受體的多肽類激動劑的方法，包括下列步驟：
a)采用噬菌體展示技術(shù)構(gòu)建待選GLP-1受體的多肽類激動劑的噬菌體展示文庫；
b)先將N-GLP-1R包被在微孔反應(yīng)板上，再將噬菌體展示文庫加入微孔與包被的N-GLP-1R相互作用，而后將與N-GLP-1R特異性結(jié)合的噬菌體從微孔反應(yīng)板上洗下，獲得與N-GLP-1R特異性結(jié)合的噬菌體；
c)將篩選得到的噬菌體感染宿主細(xì)胞，培養(yǎng)獲得克隆，擴(kuò)增后抽提噬菌體載體進(jìn)行測序，獲得與N-GLP-1R有特異性結(jié)合的多肽序列。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述待選GLP-1受體的多肽類激動劑的噬菌體展示文庫選自隨機(jī)序列的多肽噬菌體展示文庫或GLP-1受體的配體突變體噬菌體展示文庫。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述GLP-1受體的配體突變體噬菌體展示文庫選自GLP-1的突變體噬菌體展示文庫或Exendin-4的突變體噬菌體展示文庫。
4.如權(quán)利要求1或2或3所述的方法，其特征在于，所述步驟b后還包括與N-GLP-1R特異性結(jié)合的噬菌體的富集，即將與N-GLP-1R特異性結(jié)合的噬菌體從微孔反應(yīng)板上洗下后，再培養(yǎng)擴(kuò)增，而后將擴(kuò)增獲得的噬菌體庫再次加入包被了N-GLP-1R的微孔進(jìn)行反應(yīng)，重復(fù)上述步驟2-3次，與N-GLP-1R特異性結(jié)合的噬菌體從待選GLP-1受體的多肽類激動劑的噬菌體展示文庫中得到了富集。
5.如權(quán)利要求1或2或3所述的方法，其特征在于，步驟c獲得克隆后還包括用Phage-ELISA鑒定獲得的克隆與N-GLP-1R的結(jié)合活性，篩選結(jié)合活性高的多肽序列。
6.一種胰高血糖素樣肽-1受體結(jié)合多肽，由權(quán)利要求2所述方法篩選獲得，其特征在于，它具有GLP-1R結(jié)合活性，它的氨基酸序列選自SEQ?ID?NO：7、8、10、11、12之一。
7.權(quán)利要求6所述多肽在制備胰高血糖素樣肽-1受體激動劑上的用途。
8.權(quán)利要求6所述多肽應(yīng)用于制備抗糖尿病藥物。
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