[發(fā)明專利]全封閉式無菌細(xì)胞培養(yǎng)方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710041872.2
• 申請日: 2007-06-12
• 公開（公告）號: CN101323839A
• 公開（公告）日: 2008-12-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 朱學(xué)東;張露億
• 申請（專利權(quán)）人: 上海果喜生物技術(shù)發(fā)展有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司
• 代理人: 胡美強

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域，特別涉及大規(guī)模，不添加抗生素的細(xì)胞培 養(yǎng)方法。

背景技術(shù)

人體細(xì)胞治療技術(shù)是一門連結(jié)基礎(chǔ)研究和商業(yè)應(yīng)用的綜合性橋梁學(xué) 科。尤其是在人們對干細(xì)胞的認(rèn)識不斷加深的情況下，通過干細(xì)胞的分離 和體外培養(yǎng)，定向誘導(dǎo)分化成胰島細(xì)胞、神經(jīng)元細(xì)胞、心肌細(xì)胞等，將這 些細(xì)胞移植在發(fā)病部位，修復(fù)病人的組織或器官，從而使患者免受病魔的 煎熬。由于移植的細(xì)胞與患者的決定簇基因完全相同，不會產(chǎn)生通常器官 移植中的免疫排斥反應(yīng)，修復(fù)的組織或器官將良好的履行職責(zé)，無需使用 免疫抑制劑。生物體細(xì)胞治療技術(shù)是建立在細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)、有 機化學(xué)、遺傳學(xué)等學(xué)科基礎(chǔ)之上，使上述情況成為現(xiàn)實和可能，給我們?nèi)? 類帶來一場新的醫(yī)學(xué)革命，將利用生物組織工程學(xué)的方法衍生出一項完全 嶄新的再生醫(yī)療產(chǎn)業(yè)。

細(xì)胞生物治療做為一種新型的治療手段，可以在癌癥、自身免疫疾病 等疾病中起到治療作用，而且比傳統(tǒng)化療手段更為有效。生物治療中的重 要環(huán)節(jié)是細(xì)胞培養(yǎng)，而細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中面臨的主要問題是污染，為了防止 污染，目前最常用的是在培養(yǎng)基中添加抗生素，但是隨著社會的發(fā)展，由 于抗生素使用產(chǎn)生耐藥性的影響已經(jīng)越來越受到關(guān)注。事實上，在抗生素 投入使用至今的僅僅60年間，很多細(xì)菌就對抗生素產(chǎn)生了嚴(yán)重的耐藥，有 的甚至產(chǎn)生了多重耐藥。耐藥菌的出現(xiàn)是人類不合理使用抗生素的直接后 果，并且細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性的速度遠(yuǎn)遠(yuǎn)快于人類新藥開發(fā)的速度，如不遏止， 人類將進入“后抗生素時代”，也即回到抗生素發(fā)現(xiàn)之前的人們面對細(xì)菌 性感染束手無策的黑暗時代。而且中國已成為世界上濫用抗生素最為嚴(yán)重 的國家之一，WHO在國際范圍內(nèi)的多中心調(diào)查顯示，住院患者抗菌藥物使用 約30％，而我國住院患者中使用抗生素的占80％～90％，其中使用廣譜抗生 素或聯(lián)合使用兩種以上抗生素的占58％，就連門診感冒患者都有75％應(yīng)用抗 生素，大大超過了已經(jīng)很不正常的國際平均水平。目前，細(xì)胞培養(yǎng)為了防 止污染多采用抗生素，這就導(dǎo)致細(xì)胞耐藥性的產(chǎn)生，而抗生素的濫用在我 國已經(jīng)非常嚴(yán)重。

為了使注入體內(nèi)的細(xì)胞更為安全可靠，我們迫切需要建立高級凈化層 流無菌生產(chǎn)車間及生產(chǎn)工藝，在每一個環(huán)節(jié)上都嚴(yán)格要求，確保沒有細(xì)菌 污染，以徹底解決細(xì)胞體外培養(yǎng)使用抗生素的歷史。這一瓶頸問題的解決， 將確保我國人體細(xì)胞能大規(guī)模地進入體外培養(yǎng)階段，從而推動生物治療尤 其是腫瘤生物治療產(chǎn)業(yè)化的進程，造福于廣大患者。

因此本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)出高級凈化層流無菌生產(chǎn)工藝，在該工藝中 不添加抗生素，以此培養(yǎng)出的細(xì)胞更為安全可靠。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明人致力于在人體細(xì)胞體外工業(yè)化培養(yǎng)中去除抗生素，同時保證人 體細(xì)胞在培養(yǎng)過程中不被污染，人體細(xì)胞培養(yǎng)質(zhì)量不受影響。

本發(fā)明的目的就是提供一種全封閉式無菌細(xì)胞培養(yǎng)方法。

本發(fā)明提供了一種全封閉式無菌細(xì)胞培養(yǎng)方法，即對進入細(xì)胞培養(yǎng)區(qū) 域的人員、物體、空氣分別進行無菌化處理，本發(fā)明所述的細(xì)胞培養(yǎng)區(qū)域 為全封閉式。本發(fā)明方法可以用于培養(yǎng)各種細(xì)胞，包括人體細(xì)胞，如淋巴 細(xì)胞。

在一實施例中，本發(fā)明細(xì)胞培養(yǎng)方法還包括獨立的細(xì)胞預(yù)處理步驟， 使進入細(xì)胞培養(yǎng)區(qū)域的細(xì)胞無污染。即在大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)之前，先檢測細(xì) 胞是否被污染，檢測為陰性的細(xì)胞才送入細(xì)胞培養(yǎng)區(qū)域進行擴增培養(yǎng)。

較佳的，上述人員無菌化處理步驟為：操作人員進入細(xì)胞培養(yǎng)區(qū)域之 前依次進行體檢、沐浴、泡手滅菌，然后穿戴無菌工作服。

較佳的，上述物體無菌化處理步驟為對物體進行消毒或滅菌。本領(lǐng)域 技術(shù)人員可以根據(jù)物體的不同性能，選擇合適的方式進行消毒或滅菌。如 對能承受高溫濕熱消毒滅菌的物體進行高溫濕熱消毒；對于不能承受高溫 濕熱滅菌的物體，采用化學(xué)滅菌或輻照滅菌。

較佳的，上述空氣無菌化處理步驟為：空氣新風(fēng)補充量控制在30％±5％； 對于新風(fēng)口防塵無紡布、中效空氣過濾器和高效空氣過濾器定期更換。

較佳的，上述中效空氣過濾器每半年更換一次。

較佳的，上述高效空氣過濾器每年更換一次。

較佳的，上述新風(fēng)口防塵無紡布每兩周更換一次。

更佳的，上述空氣無菌化還包括：細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)束后，開啟負(fù)離子發(fā)生 器，運行30—90分鐘。在實施例中，負(fù)離子發(fā)生器的運行時間設(shè)定為45 分鐘。