[發明專利]蝦類抗菌肽基因在益生菌中的重組表達和應用

無效

• 申請號: 200710041331.X
• 申請日: 2007-05-28
• 公開（公告）號: CN101314772A
• 公開（公告）日: 2008-12-03
• 發明（設計）人: 范立強;江帆;袁勤生
• 申請（專利權）人: 上海漢德食品有限公司
• 主分類號: C12N15/09
• 分類號: C12N15/09;C12N15/12;C12P21/02;A23K1/16
• 代理公司: 上海天翔知識產權代理有限公司
• 代理人: 宋羽

技術領域

本發明涉及生物基因重組工程，具體涉及蝦類抗菌肽基因在益生菌中的重組表達和應用。

背景技術

自20世紀40年代抗生素被批準用作飼料添加劑后，為畜牧業發展起了巨大的推動作用，但隨著飼用抗生素的普及應用，其副作用逐漸突出。一是病菌產生耐藥性問題；二是濫用抗生素不但加大了飼料成本，而且引起動物免疫機能下降，體內菌群失調、發生內源性感染或二重感染，死亡增多；三是畜禽產品中的藥物殘留問題，而且給生態環境造成毒性。為避免飼用抗生素長期使用造成全球環境污染并直接危害人類的健康，歐盟1999年1月起通過立法禁止抗生素作促生長劑使用，今后的發展趨勢是盡量不使用抗生素。因此，尋求飼用抗生素的替代物已成為世界各國專家研究的熱點。近年來，飼用抗生素替代品的研究主要有益生素、寡聚糖、抗菌肽等。

抗菌肽是先天性免疫的分子受動器，是生物體內誘導產生的一種具有強抗菌作用的多肽類物質，它廣泛存在于多種生物體內，是生物體對外界病原物侵染而產生的一系列免疫反應的產物。抗菌肽分子量小，性能穩定，通常它們含有15-45個氨基酸殘基，凈電荷為正。CecroPins類型的不含半胱氨酸線性肽是最早發現的，來源于昆蟲。現已發現抗菌肽、蛋白有800個以上，來源于動物、植物領域。抗菌肽具有較強的廣譜抗菌能力，大多數對革蘭氏陽性菌有較強的殺滅作用，有些則對革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌均起作用，對某些真菌、原生動物，尤其對耐藥性細菌有殺滅作用，有些甚至對原蟲、腫瘤也有作用。

抗菌肽有不同于抗生素的獨特抗菌機理，與酶或受體等蛋白因子無關，抗菌肽主要作用靶點是細菌的膜，通過物理化學機制使膜的通透性增大，而且殺傷過程比細菌生長的速度快，通過破壞其屏障而達到殺傷細胞的效果。

與抗生素不同，抗菌肽是生物體自身具有的物質，它不產生耐藥性，也不存在毒副作用，更不存在藥物殘留問題。人們發現許多傳統的抗生素，特別是青霉素，能夠誘導耐藥菌株的產生。抗菌肽具有良好的抗菌選擇性和獨特的抗菌模式，而且不會誘導產生耐藥菌株，容易被降解，不易在微生物體內富集，因此，被認為能夠成為替代抗生素的首選藥物。

自1981年Steiner等首次從蠶蛹中誘導分離得到抗菌肽后，許多抗菌肽相繼被分離、純化，其氨基酸一級結構和基因序列得到確定。一般把抗菌肽分為4種類型：殺菌肽類(cecropins)、防御素(defensins)、蛙皮素(magainin)、蜂毒素(melittin)。蝦類抗菌肽研究是近幾年才開始的，目前已對凡納對蝦的陽離子抗菌肽(penaeidins家族)進行了系統地研究，至少發現5個亞類；戴斯特謬克司-卡森等又在凡納對蝦(Litopenaeus?vannamei)和南美白對蝦(Litopenaeus?stylirostris)中發現了抗真菌活性的3種陰離子抗菌肽。王金星等公開了中國對蝦抗菌肽基因(Ch-penaeidin)與克隆技術(CNZL，02109931.6)，中國對蝦的重組表達與應用(CN，03112294.9)。與其它種類相比，來源于魚、蝦、蟹等水生動物體內的抗菌肽殺菌作用更強，溶血效應小，種類多樣化，顯示出比其它種類更具優勢的應用前景。

但是目前，尚未有將抗菌肽基因轉入益生菌中。