[發明專利]蝦類抗菌肽基因在益生菌中的重組表達和應用

無效

• 申請號: 200710041331.X
• 申請日: 2007-05-28
• 公開（公告）號: CN101314772A
• 公開（公告）日: 2008-12-03
• 發明（設計）人: 范立強;江帆;袁勤生
• 申請（專利權）人: 上海漢德食品有限公司
• 主分類號: C12N15/09
• 分類號: C12N15/09;C12N15/12;C12P21/02;A23K1/16
• 代理公司: 上海天翔知識產權代理有限公司
• 代理人: 宋羽

1、蝦類抗菌肽在益生菌中的重組表達，包括蝦類抗菌肽基因的克隆，蝦類抗菌肽基因的重組載體的構建，抗菌肽基因重組載體的轉化與篩選，發酵培養表達抗菌肽的工程菌，表達產物的鑒定、純化；其中：

所述的重組載體的構建是：根據已克隆到的蝦類抗菌肽cDNA序列，利用特異引物在其兩端加入兩個不同的限制性內切酶的酶切位點，PCR擴增抗菌肽基因；將其克隆到益生菌表達載體上，所述的表達載體包括pPIC系列或pLA系列；

所述的轉化與篩選是將上述構建得到的載體分別轉化獲得工程菌株，篩選出所需的重組工程菌；

所述的表達產物的鑒定、純化是采用誘導劑誘導工程菌株，破細胞收集上清液，分泌型表達的細胞直接收集上清液，采用超濾、層析等方法純化抗菌肽，并測定其抗菌譜。

2、如權利要求1所述的蝦類抗菌肽在益生菌中的重組表達，其特征在于，上述的蝦類抗菌肽是草蝦抗菌肽。

3、如權利要求1或2所述的蝦類抗菌肽在益生菌中的重組表達，其特征在于，用于轉化益生菌的載體質粒，含有如pG+Host、pJIM2481、Tn916、Tn917、Tn919中一種轉座子。

4、如權利要求3所述的蝦類抗菌肽在益生菌中的重組表達，其特征在于，上述的構建重組載體步驟，還包括構建抗菌肽基因串聯多聚體。

5、如權利要求1所述的蝦類抗菌肽在益生菌中的重組表達，其特征在于，所述的益生菌為細菌、真菌和微藻。

6、如權利要求5所述的蝦類抗菌肽在益生菌中的重組表達，其特征在于，所述的細菌，包括如光合細菌、硝化細菌、硫化細菌、雙歧桿菌、乳球菌、乳桿菌、芽孢桿菌、腸球菌、鏈球菌。

7、如權利要求6所述的蝦類抗菌肽在益生菌中的重組表達，其特征在于，乳球菌優選為乳酸乳球菌，乳桿菌優選為干酪乳桿菌，或米酒乳桿菌；所述的真菌為酵母菌。

8、如權利要求7所述的蝦類抗菌肽在益生菌中的重組表達，其特征在于，所述的酵母菌優選為釀酒酵母。

9、如權利要求1-8任一項所述的蝦類抗菌肽基因在益生菌中的重組表達產物用于水產養殖業飼料。

10、如權利要求1-8任一項所述的蝦類抗菌肽基因在益生菌中的重組表達產物用于蝦類的養殖飼料。