[發明專利]從鯊魚皮分離純化生物醫藥用膠原蛋白的方法

有效

• 申請號: 200710040590.0
• 申請日: 2007-05-14
• 公開（公告）號: CN101307093A
• 公開（公告）日: 2008-11-19
• 發明（設計）人: 周培根;繆輝南;吳文惠;何培民;蔡春爾;李燕
• 申請（專利權）人: 上海水產大學
• 主分類號: C07K1/16
• 分類號: C07K1/16;C07K2/00
• 代理公司: 上海智力專利商標事務所
• 代理人: 瞿承達

技術領域：

本發明涉及一種分離純化生物醫學用膠原蛋白的方法，特別是涉及一 種從鯊魚皮中分離純化生物醫學用膠原蛋白的方法。

背景技術：

膠原蛋白或稱膠原是由動物細胞合成的一種生物性高分子，廣泛存在 于動物骨、腳、軟骨和皮膚及其它結締組織中，約占哺乳動物總蛋白的1/ 3，是人體重要的細胞外基質成份，膠原具有良好的生物學特性，可作為組 織的支持物，對細胞、組織乃至器官行使正常功能并對外傷修復有重大影 響。國內外對膠原蛋白的利用主要分為兩大類：一是著眼于膠原蛋白獨特 的宏觀物理性能，即纖維性能，用于相紙底片、紡織、造紙等；二是著眼 于其內在性能，即膠原的生物功能，用于食品保健、飼料、美容化妝品、 醫用材料等，膠原具有重要的生物學性質，力學性能高、促進細胞生長、 止血、生物相容性和生物降解性，可用作皮膚燒傷、燙傷的修補，治療和 護理，能夠減輕燒傷、燙傷的程度，杜絕感染，其在治療燒、燙傷方面起 著非常重要的作用，它可加工成“人工皮膚”，直接敷于燒、燙傷之皮膚 表面，尤其對于大面積、深度在III級以上重患者，類人膠原蛋白可用作人 工血管，實用血管嫁接以及人體受損組織的修補，例如因突發疾病，胃出 血、穿孔、膠原蛋白可結合抗生索，細胞促生因子等對受損組織可進行修 補，膠原蛋白可與骨粉、骨蛋白結合后用于肢體延伸，膠原蛋白可制作人 工器官、心臟起搏器，人體內臟的充填物等，膠原蛋白也是一種新型的生 物發酵培養基，含氨基酸種類齊全，具有微生物培養的獨特功效，是細菌 學培養、生物發酵培養基的最佳原料之一。此外，由膠原制備的材料，可 以擴散到皮膚的深層，對人的皮膚有很好的營養作用，同時由于其分子中 含有大量的羥基，它有著相當好的保濕作用。據調查在2003年最暢銷保養 品評比中，膠原蛋白最受青睞，膠原蛋白在國外流行多年，歐美不少化妝 品研發中心推出含膠原蛋白成份保養品，全球膠原蛋白目前產值超過40億 美元。關于膠原蛋白提取純化方面，雖然方法各異，但大多數是從魷魚、 鱈魚等小型魚類及家畜的皮中提取，小型魚類本身所含膠原蛋白量少，原 料有限，而從家畜皮膚中提取的此類蛋白溶解度低，并且以牛類為原料不 易被世界許多貿易組織所接受，目前提取膠原蛋白的步驟包含萃取、分離 和提純，萃取又分為酸法、堿法中性鹽法和酶法等，工藝繁瑣，也有用基 因工程方法制備蛋白，但同時又增加了成本，由于上述這些分離技術存在 的這些缺陷，使得制得的膠原蛋白產率、產量、質量都不高，以使生物醫 學用膠原蛋白價格高昂，最后，大大影響了膠原蛋白的廣泛應用，因此， 降低膠原蛋白純化成本和提高蛋白質量是關鍵。

發明內容：

本發明的目的是要提供一種從鯊魚皮分離純化生物醫藥用膠原蛋白的 方法，它不但能有效地從鯊魚皮膚中提取高質量膠原蛋白，而且，工藝簡 單，成本低廉，產率較高。

為了達到上述的目的本發明是這樣實現的：本發明的從鯊魚皮分離純 化生物醫藥用膠原蛋白的方法所使用的原料為鯊魚皮，且從中分離純化生 物醫學用膠原蛋白的方法操作如下：

(1)、將鯊魚皮用pH值為7.4-7.6的低濃度磷酸鹽緩沖液浸泡沖洗去掉鱗 和殘肉，并切成小塊，再用去離子水浸泡沖洗3～5次；

(2)、清洗干凈的魚皮且用原料量五倍的pH值為7.4-7.6的中濃度磷酸鹽 緩沖液浸泡70～75小時后，勻漿15min，在溫度為4℃，轉速為10000rpm， 離心15min，取上清液；

(3)、再沉淀重復(2)的過程一次，將合并上清液，加硫酸銨至飽和度 80％，在溫度為4℃，轉速為8000rpm，離心15min，保留沉淀；

(4)、將沉淀溶在pH值為7.0的中濃度磷酸緩沖液中；

(5)、用G-75，100，150葡聚糖層析上述溶解液，收集蛋白溶出液于溫 度為4℃，轉速為10000rpm，離心15min，上清液濃縮，冷凍干燥后得到生 物醫學用膠原蛋白。

所述的低濃度磷酸鹽緩沖液是濃度為8-12mM，pH值為7.4-7.6的磷酸 氫二鈉緩沖液，所述的中濃度磷酸鹽緩沖液是濃度為80-120mM，pH值為 7.4-7.6的磷酸氫二鈉緩沖液，所述的中濃度磷酸緩沖液的濃度為180- 220mM，pH值為7.0，其用量為1.5g/ml。

由于本發明以鯊魚皮為材料，通過堿洗、透析等方法提取和純化膠原 蛋白，因此具有以下優點：