[發明專利]一種抗體親和層析純化溶葡萄球菌酶的方法

有效

• 申請號: 200710040561.4
• 申請日: 2007-05-11
• 公開（公告）號: CN101302504A
• 公開（公告）日: 2008-11-12
• 發明（設計）人: 黃晉江;張繼恩;黃青山
• 申請（專利權）人: 上海高科聯合生物技術研發有限公司
• 主分類號: C12N9/36
• 分類號: C12N9/36
• 代理公司: 上海光華專利事務所
• 代理人: 余明偉

1.一種抗體親和層析純化溶葡萄球菌酶的方法，其特征在于，包括如 下步驟：

(1)溶葡萄球菌酶抗體的處理：

將含有溶葡萄球菌酶抗體的樣品通過預先用緩沖液A平衡好的裝有 proteinA樹脂的層析柱，然后用緩沖液A清洗上樣后的proteinA層析柱； 再用pH2.0～4.0的緩沖液B將溶葡萄球菌酶抗體從層析柱上洗脫，并收集 洗脫峰，凍干；

(2)免疫親和層析介質的制備

將步驟(1)收集的凍干產物與親和層析介質混合，偶聯反應，制得免 疫親和層析介質；

(3)溶葡萄球菌酶用免疫親和層析介質進行純化

將溶葡萄球菌酶樣品通過預先用緩沖液A平衡好的裝有步驟(2)的免 疫親和層析介質的層析柱；

然后用緩沖液A清洗上樣后的免疫親和層析柱；

再用pH2.5～4.5的緩沖液C將溶葡萄球菌酶從層析柱上洗脫，并收集 洗脫峰；

所述緩沖液A選自PBS、Tris-HCl或硼酸緩沖液中的一種以上，緩沖 液A的pH為7.0-9.0；

所述緩沖液B選自Na₂HPO₄-檸檬酸、Gly-HCl或鄰苯二甲酸-HCl緩 沖液中的一種以上；

所述緩沖液C選自醋酸-醋酸鈉、Na₂HPO₄-檸檬酸或檸檬酸-檸檬酸鈉 緩沖液中的一種以上。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所說的緩沖液A平衡裝 有protein?A樹脂的層析柱的方法，包括如下步驟：用pH7.0-9.0的緩沖液A 通過層析柱，用量為層析柱體積的3～10倍。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所說的緩沖液A清洗上 樣后的proteinA樹脂層析柱的方法，包括如下步驟：用pH7.0-9.0的緩沖液 A清洗上樣后的protein?A樹脂層析柱，用量為protein?A樹脂層析柱體積的 3～10倍。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所說的親和層析介質選 自交聯瓊脂糖、纖維素、硝化纖維素、丙烯酰胺聚合物、聚醚砜或脫乙酰 殼多糖中的一種以上。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所說的緩沖液平衡免疫 親和層析介質的層析柱包括如下步驟：將pH7.0-9.0的緩沖液A通過裝有免 疫親和層析介質的層析柱，用量為層析柱體積的3～10倍。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所說的緩沖液A清洗上 樣后的免疫親和層析柱包括如下步驟：用pH7.0-9.0的緩沖液A清洗上樣后 的免疫親和層析柱，用量為層析柱體積的3～10倍。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，緩沖液B 的用量為protein?A樹脂層析柱體積的3～10倍，步驟(3)中，緩沖液C的 用量為層析柱體積的3～10倍。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)中，緩沖液C 以每分鐘1～4ml的流速將溶葡萄球菌酶從層析柱上洗脫。