[發明專利]測量活細胞內青色熒光蛋白和黃色熒光蛋白濃度比的方法

無效

• 申請號: 200710040503.1
• 申請日: 2007-05-10
• 公開（公告）號: CN101055251A
• 公開（公告）日: 2007-10-17
• 發明（設計）人: 付國;王桂英;徐至展
• 申請（專利權）人: 中國科學院上海光學精密機械研究所
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N33/68;G06F19/00
• 代理公司: 上海新天專利代理有限公司
• 代理人: 張澤純

技術領域

本發明涉及活細胞內青色熒光蛋白和黃色熒光蛋白，特別是一種利用熒光共振能量轉移(fluorescence?resonance?energy?transfer，以下簡稱為FRET)測量活細胞內青色熒光蛋白和黃色熒光蛋白濃度比的方法。

背景技術

FRET是一種無輻射的能量轉移過程，是處于激發態的熒光團(供體)通過長程的偶極子—偶極子的相互作用把能量轉移給另一個分子(受體)，導致供體熒光的淬滅和受體發光的增強的過程。參見【G.W.Gordon，G.Berry，X.H.Liang，B.Levine，B.Herman，Quantitative?fluorescence?resonance?energy?transfer?measurements?usingfluorescence?microscopy.Biophys.J.74(1998)2702-2713】。為了便于FRET的發生，實驗中需要合理的控制供體與受體的濃度之比，然而在活細胞內測量供體與受體的濃度之比是比較困難的事情，目前青色熒光蛋白(cyan?fluorescent?protein，簡稱為CFP蛋白)和黃色熒光蛋白(yellow?fluorescent?protein，簡稱為YFP蛋白)是最常用的FRET供體-受體對，測量活細胞內CFP與YFP濃度之比是迫切需要解決的問題。

發明內容

本發明的目的在于提出一種測量活細胞內青色熒光蛋白和黃色熒光蛋白濃度比的方法，

本發明的技術解決方案如下：

一種測量活細胞內青色熒光蛋白和黃色熒光蛋白濃度比的方法，更確切地說是利用三通道熒光共振能量轉移顯微鏡測量活細胞內青色熒光蛋白(cyan?fluorescentprotein，簡稱為CFP)和黃色熒光蛋白(yellow?fluorescent?protein，簡稱為YFP)濃度之比的方法。

推導三通道熒光共振能量轉移顯微鏡測量活細胞內CFP與YFP濃度比的公式：

表觀熒光共振能量轉移效率E_app可以表述如下式【參見M.G.Erickson，B.A.Alseikhan，B.Z.Peterson，D.T.Yue，Preassociation?of?calmodulin?with?voltage-gatedca²⁺?channels?revealed?by?FRET?in?single?living?cells.Neuron?31(2001)973-985】：

??????????E_app＝E×D_b＝[1-S_CFP(DA)_before/S_CFP(DA)_after]????(1)

這里，E指FRET效率，D_b指發生FRET的CFP分子數與總的CFP分子數的比例，

S_CFP(DA)_before和S_CFP(DA)_after指YFP熒光蛋白被漂白前后，CFP熒光蛋白的平均熒光強度。

同時，表觀的FRET效率E_app又可以表述如下【參見T.Zal，N.R.Gascoigne，Photobleaching-Corrected?FRET?Efficiency?Imaging?of?Live?Cells.Biophys.J.86(2004)3923-3939】，

E app = F C F C + G × CFP - - - ( 2 ) ]]>