[發(fā)明專利]測量活細(xì)胞內(nèi)青色熒光蛋白和黃色熒光蛋白濃度比的方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200710040503.1
• 申請(qǐng)日: 2007-05-10
• 公開（公告）號(hào): CN101055251A
• 公開（公告）日: 2007-10-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 付國;王桂英;徐至展
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院上海光學(xué)精密機(jī)械研究所
• 主分類號(hào): G01N21/64
• 分類號(hào): G01N21/64;G01N33/68;G06F19/00
• 代理公司: 上海新天專利代理有限公司
• 代理人: 張澤純

1、一種測量活細(xì)胞內(nèi)青色熒光蛋白和黃色熒光蛋白濃度比的方法，特征在于該方法是利用三通道熒光共振能量轉(zhuǎn)移顯微鏡測量活細(xì)胞內(nèi)青色熒光蛋白和黃色熒光蛋白濃度比的方法，青色熒光蛋白以下簡稱為CFP蛋白，黃色熒光蛋白以下簡稱為YFP蛋白，包括下列步驟：

①測量三通道熒光共振能量轉(zhuǎn)移顯微鏡漏過系數(shù)：

在中國倉鼠卵巢癌細(xì)胞，簡稱為CHO細(xì)胞，內(nèi)分別表達(dá)CFP蛋白和YFP蛋白，分別測量表達(dá)YFP蛋白的CHO細(xì)胞在熒光共振能量轉(zhuǎn)移通道，簡稱為FRET通道和YFP通道內(nèi)的平均熒光強(qiáng)度，利用下列公式計(jì)算漏過系數(shù)a，

a＝I_FRET(Y)/I_YFP(Y)

分別測量表達(dá)CFP蛋白的CHO細(xì)胞在FRET通道和CFP通道內(nèi)的平均熒光強(qiáng)度，根據(jù)下式計(jì)算漏過系數(shù)b，

b＝I_FRET(C)/I_CFP(Y)

式中：I_FRET(Y)表示YFP蛋白在FRET通道內(nèi)的平均熒光強(qiáng)度，I_YFP(Y)表示YFP蛋白在YFP通道內(nèi)的平均熒光強(qiáng)度，I_FRET(C)表示CFP蛋白在FRET通道內(nèi)的平均熒光強(qiáng)度，I_CFP(C)表示CFP蛋白在CFP通道內(nèi)的平均熒光強(qiáng)度；

②利用三通道熒光共振能量轉(zhuǎn)移顯微鏡測量活細(xì)胞內(nèi)CFP蛋白與YFP蛋白濃度之比：

在CHO細(xì)胞內(nèi)共表達(dá)CFP和YFP，共表達(dá)CFP和YFP的CHO細(xì)胞用三通道熒光共振能量轉(zhuǎn)移顯微鏡分別記錄CFP通道、YFP通道和FRET通道內(nèi)的平均熒光強(qiáng)度，根據(jù)下式，計(jì)算三CHO細(xì)胞內(nèi)的CFP蛋白和YFP蛋白濃度之比：

[ D ] [ A ] = ( F C + G × CFP ) a × YFP × ϵ YFP ( 440 ) ϵ CFP ( 440 ) ]]>

式中：F_C為凈FRET值，F(xiàn)_C＝FRET-a×YFP-b×CFP

??????G稱為G參數(shù)，

ε_YFP(440)/ε_CFP(440)指在440nm波長的光激發(fā)時(shí)，YFP蛋白與CFP蛋白的吸收系數(shù)之比，其值為0.094，

CFP和YFP分別表示CFP通道和YFP通道內(nèi)的平均熒光強(qiáng)度，

FRET為FRET通道的平均熒光強(qiáng)度。

2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的測量活細(xì)胞內(nèi)青色熒光蛋白和黃色熒光蛋白濃度比的方法，其特征在于所述的G參數(shù)的值由下列公式計(jì)算：

G＝[1-(FR-1)×0.094]×F_C/[(FR-1)×0.094×CFP]

式中：FR＝[FRET-(b×CFP)]/(a×YFP)。

3、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的測量活細(xì)胞內(nèi)青色熒光蛋白和黃色熒光蛋白濃度比的方法，其特征在于所述的G參數(shù)的值為5.40。