[發明專利]抗犬細小病毒卵黃抗體生物制劑的制備方法

無效

• 申請號: 200710040471.5
• 申請日: 2007-05-10
• 公開（公告）號: CN101062413A
• 公開（公告）日: 2007-10-31
• 發明（設計）人: 劉永德;唐峰;葉陳梁;汪毅
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: A61K39/395
• 分類號: A61K39/395;C07K16/08;A61P31/14
• 代理公司: 上海交達專利事務所
• 代理人: 王錫麟;張宗明

1、一種抗犬細小病毒卵黃抗體生物制劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟一，采集診斷為細小病毒感染的病死犬的腸道及內容物按重量比1∶1加生理鹽水研磨，離心去除沉渣，上清液離心去除微小顆粒；

步驟二，在去除微小顆粒后的上清液中加入氯仿，劇烈振蕩，離心去除脂溶性物質；

步驟三，取去除脂溶性物質后的上清液，加入醛化、洗滌后的豬紅細胞，搖勻放置進行病毒吸附，離心沉淀豬紅細胞，加入高滲鹽水后放置進行病毒釋放，離心去除豬紅細胞，取病毒釋放液，測HA效價，達1∶4096有效；

步驟四，取上述病毒釋放液經甲醛滅活后加入褐藻多糖，制備成油乳劑犬細小病毒疫苗，將制備的犬細小病毒疫苗免疫20周齡以上經產母雞，用血凝抑制試驗進行效價測定，當卵黃中HI效價達1∶256以上時收集免疫卵，效價低于1∶128時進行第三次免疫；

步驟五，收獲卵黃用無菌蒸餾水對倍稀釋，用乳酸液進行酸處理去除雜蛋白、凍融去脂，抽濾液經硫酸銨鹽析提取IgY，除鹽后稀釋封裝安培瓶中，放水浴箱處理，經口服安全性檢驗及微生物檢驗合格后即成口服生物制劑。

2、根據權利要求1所述的抗犬細小病毒卵黃抗體生物制劑的制備方法，其特征是，步驟一中，所述上清液離心去除微小顆粒，是指：上清液在20000rpm離心60分鐘去除微小顆粒。

3、根據權利要求1所述的抗犬細小病毒卵黃抗體生物制劑的制備方法，其特征是，步驟二中，所述加入氯仿，是指：按去除微小顆粒后的上清液總體積的10％加入氯仿。

4、根據權利要求1所述的抗犬細小病毒卵黃抗體生物制劑的制備方法，其特征是，步驟三中，所述醛化，是指用體積百分比為2.5％的戊二醛對豬紅細胞進行醛化；所述搖勻放置進行病毒吸附，是指搖勻4℃放置2小時進行病毒吸附。

5、根據權利要求1或4所述的抗犬細小病毒卵黃抗體生物制劑的制備方法，其特征是，步驟三中，所述加入高滲鹽水后放置，是指：加入體積比為4％的鹽水配成體積比10％的紅細胞懸液，在37℃放置2小時。

6、根據權利要求1所述的抗犬細小病毒卵黃抗體生物制劑的制備方法，其特征是，步驟四中，所述褐藻多糖，其使用量為：每毫升釋放病毒液體含4毫克褐藻多糖。

7、根據權利要求1所述的抗犬細小病毒卵黃抗體生物制劑的制備方法，其特征是，步驟五中，所述用乳酸液進行酸處理去除雜蛋白，是指：用乳酸液調pH4.4進行酸處理去除雜蛋白。

8、根據權利要求1或7所述的抗犬細小病毒卵黃抗體生物制劑的制備方法，其特征是，步驟五中，所述凍融去脂，是指：-40℃凍融處理2次去除脂質。

9、根據權利要求1或7所述的抗犬細小病毒卵黃抗體生物制劑的制備方法，其特征是，步驟五中，所述經硫酸銨鹽析提取IgY，采用的硫酸銨飽和度為35％；所述稀釋，是指：用無菌水稀釋成每毫升加入褐藻多糖后的釋放病毒液體含2毫克IgY。

10、根據權利要求1或7所述的抗犬細小病毒卵黃抗體生物制劑的制備方法，其特征是，步驟五中，所述放水浴箱處理，是指：放65℃水浴箱處理20分鐘。