[發明專利]扶正化瘀植物藥中蟲草菌粉原料指紋圖譜質量控制方法

有效

• 申請號: 200710040135.0
• 申請日: 2007-04-27
• 公開（公告）號: CN101293002A
• 公開（公告）日: 2008-10-29
• 發明（設計）人: 胡坪;潘一峰
• 申請（專利權）人: 上海現代中醫藥技術發展有限公司
• 主分類號: A61K36/068
• 分類號: A61K36/068;A61P15/10;A61P11/00;A61P29/00;G01N30/02;G01N30/86;C12N1/14
• 代理公司: 上海泰能知識產權代理事務所
• 代理人: 黃志達;謝文凱

技術領域

本發明屬蟲草菌粉原料質量控制方法領域，特別是涉及一種扶正化瘀植物藥中蟲草菌粉原料指紋圖譜質量控制方法。

背景技術

冬蟲夏草為麥角菌科真菌冬蟲夏草菌寄生在蝙蝠蛾科昆蟲幼蟲上的子座及幼蟲尸體的復合體，是久享盛譽的名貴中藥。它分布于中國的青海、西藏、四川等地，存在于中國西北和西南部海拔3000-4000m山區的多草的土壤中。露在土壤表面部分為真菌的子實體，長3-6cm，色黑，形如刀刃。埋在土中的蟲體部分長2.5-4m，黃色至深棕色。因其形態隨季節發獨特變化，科季為蟲形夏季呈草狀，故在我國稱之為“冬蟲夏草”。冬蟲夏草早在《本草從新》中已有記載，《本草綱目拾遺》中記載尤詳。性味甘，平，歸肺、腎經。補肺益腎，止血，化痰。用于久咳虛喘，勞嗽咯血，陽痿遺精，腰膝酸痛。

近年來，國內報道與蟲草有關的菌種達10個屬的30多種^[17][18]。例如：

(1)冬蟲夏草頭孢菌(Cephalosporium?sinensis)從青海產冬蟲夏草中分離得到，屬半知菌類，叢梗孢目，叢梗孢科，頭孢霉族，頭孢霉屑。(2)蝙蝠蛾擬青霉(Paecilomyces?hepiali)從青海化隆縣產冬蟲夏草上分離得到，屬半知菌類，叢梗孢目，叢梗孢科，曲霉族，瓶梗青霉屬。(3)蝙蝠蛾被孢霉(Mortierella?hepiali)從四川汶川產冬蟲夏草上分離得到，屬藻狀菌綱，毛霉目，被孢霉科，被孢霉屑。(4)中國擬青霉(Paecilomyees?sinensis)從四川康定產冬蟲夏草上分離得到，屬半知菌類，叢梗孢目，叢梗孢科，被孢霉屑。(5)其它還有蟲草多毛孢(Hirsutella?hepiti)、中國被毛孢(Hirsutella?sinensis)、蝙蝠蛾柱霉(Scytalidium?hepiale)、中國彎頸霉(Tolypocladium?sinensis)、中國金孢霉(Chrysosporium?sinensis)、葡萄穗霉屬(Stachybotry)等

本發明生產的蟲草菌粉即是蝙蝠蛾擬青霉(Paecilomyces?hepiali)Cs-4菌株深層培養的發酵產物。本品為淺棕褐色的粉末；氣香，味微味。Cs-4菌株從青海化隆縣產冬蟲夏草上分離得到，屬半知菌類，叢梗孢目，叢梗孢科，曲霉族，瓶梗青霉屬。

關于蟲草菌粉的的制備，中國醫學科院藥物研究所楊云鵬、岳德超等最早對青海蟲草分離的蝙蝠蛾擬青霉(Paecilomyces?hepiali)Cs-4菌株及其深層培養其進行了研究。中國中醫研究院中藥研究所，戴如琴等后來又對從云南天然蟲草中分離出來的蝙蝠蛾擬青霉新種((Paecilomyces?hepiali?chen?et?Dai.sp.nov)進行了研究。

腺苷含量是評價冬蟲夏草內在質量的主要指標，目前核苷類物質的分析方法有HPLC法、薄層色譜法、高效毛細管電泳法等。夏文娟等用HPLC法分析了13個產地冬蟲夏草腺苷的含量，結果13個產地冬蟲夏草的腺苷含量為142.5～396.6ug/g，其中藏草腺苷含量高于川草，在川草中，爐草腺苷含量高于滇草，灌草最低。Li等用高效毛細管電泳法測定天然和人工冬蟲夏草中核苷成分的含量，結果顯示人工蟲草的核苷含量明顯高于天然蟲草；新采集的天然蟲草中核苷類物質含量極低，而采集日久者核苷成分含量較高，因此腺苷在天然冬蟲夏草質量控制中的具有應用價值。米莉莉等建立了對冬蟲夏草一次進樣使核苷類成分得到理想分離的HPLC定量分析方法。

關于蟲草屬真菌中核苷類化學成分的研究報道較多，主要集中在冬蟲夏草、蛹蟲草及其發酵菌絲體，至今已報道從冬蟲夏草及發酵菌絲體中分離鑒定有11個核苷類化合物^[13]，而對冬蟲夏草無性型菌株的發酵液中核苷類成分的研究則較少。丁婷等^[12]用HPLC法對冬蟲夏草及其無性型菌株發酵液中核苷類成分進行了定量分析。結果表明，中國被毛孢RCEF0273發酵液中含有3種核苷標樣，分別為腺苷、尿苷、鳥苷，其含量均高于對照品冬蟲夏草生藥。

姜麗霞等^[14]用HPLC對四種人工培養冬蟲夏草發酵菌絲體中主要核苷及核酸堿基進行了測定，著重對其中的腺苷成分作了提取溶劑比較及回收率試驗。