[發(fā)明專利]一種土壤DNA樣品制備試劑盒及其制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710037850.9
• 申請日: 2007-03-06
• 公開（公告）號: CN101235350A
• 公開（公告）日: 2008-08-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙慶節(jié);沈根祥;梁丹濤;胡雙慶;郭春霞;顧海蓉;錢曉雍;黃麗華;周海花
• 申請（專利權(quán)）人: 上海市環(huán)境科學(xué)研究院
• 主分類號: C12M1/34
• 分類號: C12M1/34;C12Q1/68
• 代理公司: 上海伯瑞杰知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 杜林雪

1.?一種土壤DNA樣品制備試劑盒，包括盒體和隔板，其特征在于：盛有溶液I的試劑瓶A，盛有溶液II的試劑瓶B，盛有溶液III的試劑瓶C，盛有溶液IV的試劑瓶D，盛有懸液V的試劑瓶E，內(nèi)含酸洗玻璃珠的離心管F，微型過濾器G，PCR(鏈?zhǔn)骄酆厦阜磻?yīng))管H。

2.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種土壤DNA樣品制備試劑盒，其特征在于：溶液I為120mmol/l的磷酸鹽緩沖液；溶液II的配比組成為Tris·HCl?10mmol/l，EDTA?1mmol/l，CTAB?0.2％，pH8.0；溶液III為5mol/l的醋酸銨；溶液IV為異丙醇；懸液V的配比組成是質(zhì)量體積比為2％的Sephadex?G75；酸洗玻璃珠0.5g，直徑約0.2mm；PCR管H的體積為200μl，內(nèi)盛有DNA引物各0.25μmol，Taq酶2U，4種dNTP各200μmol，1×PCR反應(yīng)緩沖液100ul，冷凍干燥所得。

3.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種土壤DNA樣品制備試劑盒，其特征在于：離心管F為2ml的離心管。

4.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種土壤DNA樣品制備試劑盒，其特征在于：所有試劑與耗材均經(jīng)無菌處理。

5.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種土壤DNA樣品制備試劑盒，其特征在于：所述的異丙醇保存在棕色試劑瓶中。

6.?土壤DNA樣品制備步驟如下：

A)選擇用于實(shí)驗(yàn)的環(huán)境土壤樣品；

B)將用于步驟A)中的農(nóng)田土壤經(jīng)細(xì)胞裂解液裂解后，獲得土壤中的所有微生物的基因組DNA；

C)將步驟B)獲得的基因組DNA純化后作為PCR擴(kuò)增的模板；

D)選擇一般用于原核生物16SrRNA(16S核糖體核糖核酸)基因擴(kuò)增的通用引物對；

E)在步驟D)選擇的通用引物對的正向引物的一端加上GC發(fā)卡結(jié)構(gòu)；

F)按照設(shè)計(jì)的PCR反應(yīng)條件進(jìn)行PCR擴(kuò)增；

G)將步驟F)所述的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物作為樣品保存?zhèn)溆谩?!-- SIPO -->