[發明專利]固態發酵微生物總DNA提取方法

無效

• 申請號: 200710035676.4
• 申請日: 2007-09-03
• 公開（公告）號: CN101148664A
• 公開（公告）日: 2008-03-26
• 發明（設計）人: 宋琳玲;曾光明;陳耀寧;范長征;王仁佑
• 申請（專利權）人: 湖南大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 湖南兆弘專利事務所
• 代理人: 田嘉嘉

1.一種固態發酵微生物總DNA提取方法，包括以下步驟：

a.樣品的洗滌：固態發酵樣須用0.1M磷酸鹽緩沖液洗滌三次；

b.DNA的提?。和鲜鱿礈旌蟮墓虘B發酵樣中加入異丙醇，用超聲波冰浴超聲，樣品破碎以后，高速離心至樣品完全沉淀，去上清液；往沉淀中加入十六烷基三甲基溴化胺抽提液，65℃水浴，完全反應后，加入等體積的氯仿-異戊醇，高速離心至沉淀完全，并回收水相；在回收水相中加入1/10體積的CTAB-NaCl溶液，65℃水浴待完全反應后，加入等體積的氯仿-異戊醇，再高速離心至沉淀完全，并回收水相；在回收水相中加入0.6倍體積的預冷異丙醇，并在-20℃放置待充分反應后，再高速離心至沉淀完全，去上清液；沉淀用預冷的乙醇重復洗滌和干燥，干燥后的沉淀溶于TE緩沖液中，得到粗提DNA；

c.DNA的純化：上述粗提的DNA經純化試劑盒純化以后，在其純化產物中加入核糖核酸酶，37℃水浴消化，以除去RNA。

2.根據權利要求1所述的固態發酵微生物總DNA提取方法，其特征在于所述步驟b中每1g固態發酵樣中加入異丙醇4mL。

3.根據權利要求1或2所述的固態發酵微生物總DNA提取方法，其特征在于所述步驟b中，超聲過程中破碎5.2s，停2.4s，振幅45％。

4.根據權利要求1或2所述的固態發酵微生物總DNA提取方法，其特征在于所述步驟b中，氯仿-異戊醇體積比為24∶1。

5.根據權利要求1或2所述的固態發酵微生物總DNA提取方法，其特征在于所述步驟b中，每1g沉淀中加入CTAB抽提液1000μL，所述加入的CTAB抽提液中還含有體積百分數為2％的β-巰基乙醇。

6.根據權利要求1或2所述的固態發酵微生物總DNA提取方法，其特征在于所述步驟b中，異丙醇、氯仿、異戊醇質量分數均＞99％。

7.根據權利要求1或2所述的固態發酵微生物總DNA提取方法，其特征在于所述步驟b中，CTAB-NaCl溶液組成為：10mg/mL?CTAB，0.7mol/L?NaCl。

8.根據權利要求1或2所述的固態發酵微生物總DNA提取方法，其特征在于所述步驟c中，加入的核糖核酸酶終濃度為0.5μg/mL。