[發明專利]TPO基因修飾的人骨髓間質干細胞及其制備方法和用途

有效

• 申請號: 200710034396.1
• 申請日: 2007-02-07
• 公開（公告）號: CN101240263A
• 公開（公告）日: 2008-08-13
• 發明（設計）人: 譚孟群;周小瑩
• 申請（專利權）人: 中南大學
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/861;A61K35/28;A61P7/00
• 代理公司: 中南大學專利中心
• 代理人: 胡燕瑜

1.?TPO基因修飾的人骨髓間質干細胞，其特征在于：所述人骨髓間質干細胞由重組腺相關病毒介導的TPO基因所修飾。

2.?TPO基因修飾的人骨髓間質干細胞的制備方法，其特征在于依次包含以下步驟：(1)克隆人胎肝TPO基因，構建載體質粒pAAV-TPO-IRES-hrGFP；(2)制備rAAV-TPO病毒載體；(3)培養人骨髓間質干細胞；(4)將rAAV-TPO轉染到人骨髓間質干細胞。

3.?如權利要求2所述的方法，其特征在于：所述步驟(1)中的TPO基因片段通過EcoR?I酶切后插入pAAV-GFP；構建的質粒pAAV-TPO-IRES-hrGFP在β-globin?intron序列中合成一段引物作為測序引物：ATTCTGAGTCCAAGCTAGGC；另外，在TPO基因的480bp位置和858bp位置合成測序引物，分別為：5′-GCGTTTCCTGATGCTTGTAG-3′，5′-CAACCTCCAGCCTGGATATT-3′。

4.?如權利要求2所述的方法，其特征在于所述步驟(2)采用磷酸鈣共沉淀法將pAAV-TPO、pAAV-RC、pHelper三種質粒共轉染至HEK293而制備得到rAAV-TPO病毒載體。

5.?如權利要求2所述的方法，其特征在于所述步驟(4)rAAV-TPO轉染到人骨髓間質干細胞的過程為：將人MSCs用0.25％胰蛋白酶/0.02％EDTA消化后，用PBS緩沖液洗滌，按1個MSCs加入10⁵顆粒的rAAV-TPO病毒液混勻，培養。

6.?如權利要求5所述的方法，其特征在于：所述人骨髓間質干細胞為生長融合達到80％～90％的第3代人MSCs。

7.?TPO基因修飾的人骨髓間質干細胞在制備促血小板生成藥物中的用途，其特征在于：用TPO基因修飾的人骨髓間質干細胞或TPO基因修飾的人骨髓間質干細胞分泌液制備成促血小板生成的藥物。