[發(fā)明專利]一種復(fù)合菌種發(fā)酵劑及其制備方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200710034296.9
• 申請(qǐng)日: 2007-01-18
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101225365A
• 公開(kāi)（公告）日: 2008-07-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬小明
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 馬小明
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12N1/16;A23C9/12;A61K35/74;A61K36/064;A61P1/00;A61P3/00;A61P9/12;A61P9/00;C12R1/225;C12R1/23;C12R1/245;C12R1/865
• 代理公司: 南昌佳誠(chéng)專利事務(wù)所
• 代理人: 閔蓉;劉守正

1.一種復(fù)合菌種發(fā)酵劑，其特征在于它主要是由下列等量重量比原料制成：德氏乳桿菌保加利亞亞種、乳酸乳球菌、腸膜明串珠菌、嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌、克魯維酵母、釀酒酵母，進(jìn)行高密度培養(yǎng)后真空冷凍干燥，制成直投式單菌發(fā)酵劑再以等量細(xì)胞數(shù)目復(fù)合成復(fù)合菌種發(fā)酵劑。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種復(fù)合菌種發(fā)酵劑的制備方法如下：

(1)對(duì)菌種德氏乳桿菌保加利亞亞種、乳酸乳球菌、腸膜明串珠菌、嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌、克魯維酵母和酒香酵母，進(jìn)行高密度培養(yǎng)，方法和步驟如下；各菌以3～5％培養(yǎng)基的量接種到優(yōu)化培養(yǎng)基中，全自動(dòng)發(fā)酵罐培養(yǎng)，流加無(wú)菌30％Na₂CO₃溶液控制發(fā)酵過(guò)程中的pH值，培養(yǎng)3～6小時(shí)后添加培養(yǎng)基量的0.1～20％增殖因子，培養(yǎng)3～6小時(shí)后流加相同體積的優(yōu)化培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，繼續(xù)培養(yǎng)4～10小時(shí)后收集發(fā)酵液；

(2)對(duì)各菌種培養(yǎng)基再分別發(fā)酵；

①德氏乳桿菌保加利亞亞種：以12％脫脂奶+蛋白水解酶為優(yōu)化培養(yǎng)基，以3～5％麥芽汁+3～5％酵母粉+5～10％番茄汁為增殖因子，增殖因子添加量為培養(yǎng)基的10～20％，控制pH值為6.5，在半連續(xù)培養(yǎng)裝置中30℃連續(xù)培養(yǎng)16～24小時(shí)，攪拌速度是200～250rpm，不通氣發(fā)酵；

②乳酸乳球菌：以12％脫脂奶+蛋白水解酶為優(yōu)化培養(yǎng)基，以5～10％麥芽汁+1～3％酵母粉+15～20mg/L?Vc為增殖因子，增殖因子添加量為培養(yǎng)基的10～20％，控制pH值為6.0，在半連續(xù)培養(yǎng)裝置中32℃連續(xù)培養(yǎng)16～24小時(shí)，攪拌速度是200～250rpm，不通氣發(fā)酵；

③腸膜明串珠菌：以蛋白胨0.5％+酵母膏0.5％+葡萄糖1％+檸檬酸鈉0.15％+磷酸二氫鉀0.1％為優(yōu)化培養(yǎng)基，以0.005～0.11％Mg²⁺+0.005～0.01％Mn²⁺+3～5％酵母粉為增殖因子，增殖因子添加量為培養(yǎng)基的5～10％，控制pH值為6.5，在半連續(xù)培養(yǎng)裝置中32℃連續(xù)培養(yǎng)16～24小時(shí)，攪拌速度200～250rpm，通氣量為1～2vol/vol/min；

④嗜酸乳桿菌：以12％脫脂奶+蛋白水解酶為優(yōu)化培養(yǎng)基，以3～5％麥芽汁+3～5％酵母粉+15～20％番茄汁為增殖因子，增殖因子添加量為培養(yǎng)基的10～20％，控制pH值為6.5，在半連續(xù)培養(yǎng)裝置中35℃連續(xù)培養(yǎng)12～14小時(shí)，攪拌速度200～250rpm，通氣量為1～2vol/vol/min發(fā)酵；

⑤干酪乳桿菌：以12％脫脂奶+蛋白水解酶為優(yōu)化培養(yǎng)基，以5～10％麥芽汁+2～3％酵母粉+5～15％番茄汁為增殖因子，增殖因子添加量為培養(yǎng)基的10～20％，pH值為6.5，在半連續(xù)培養(yǎng)裝置中30℃連續(xù)培養(yǎng)16-24小時(shí)，攪拌速度200～250rpm，不通氣發(fā)酵；

⑥克魯維酵母：以2％酵母膏+1％蛋白胨+2％葡萄糖+0.1％KH₂PO₄為優(yōu)化培養(yǎng)基，以0.15～0.35mg/mL?Zn²⁺+45～60μg/mL生物素+45～60μg/mL肌醇為增殖因子，增殖因子添加量為培養(yǎng)基的0.30～1％，控制pH值為6.5，在半連續(xù)培養(yǎng)裝置中28℃連續(xù)培養(yǎng)16～24小時(shí)，攪拌速度是280～300rpm，通氧氣量為10～20vol/vol/min發(fā)酵；

⑦酒香酵母：以2％酵母膏+1％蛋白胨+2％葡萄糖+0.1％KH₂PO₄為優(yōu)化培養(yǎng)基，以0.25～0.35mg/mL?Zn²⁺+60～80μg/mL生物素+35～55μg/mL肌醇為增殖因子，增殖因子添加量為培養(yǎng)基的0.25～1％，控制pH值為6.5，在半連續(xù)培養(yǎng)裝置中28℃連續(xù)培養(yǎng)16～24小時(shí)，攪拌速度是250～280rpm，通氧氣量為10～20vol/vol/min發(fā)酵；

(3)分別將以上各單菌發(fā)酵液在0～5℃條件下，轉(zhuǎn)速為8000～15000轉(zhuǎn)/分鐘由高速冷凍離心機(jī)進(jìn)行處理，離心后的濃縮菌體在無(wú)菌條件下加入細(xì)胞保護(hù)劑，各種濃縮菌體加入如下細(xì)胞的保護(hù)劑；

(4)將以上各單菌分別凍干：在-60～-40℃預(yù)凍24小時(shí)后真空冷凍，冷凍干燥溫度-60℃，真空度為3～6pa，真空冷凍干燥24～36小時(shí)得到單菌凍干制品，各單菌凍干制品等細(xì)胞數(shù)目均勻混合后用錫箔密封真空包裝即為復(fù)合菌種發(fā)酵劑成品。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種復(fù)合菌種發(fā)酵劑的制備方法，其特征在于：所述的細(xì)胞保護(hù)劑由如下表組成：