[發(fā)明專利]沙門氏菌顯色培養(yǎng)基、檢測試劑盒及檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710032778.0
• 申請日: 2007-12-21
• 公開（公告）號: CN101186891A
• 公開（公告）日: 2008-05-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 盧勉飛;蔡芷荷;吳清平
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東環(huán)凱微生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12Q1/04;C12R1/42
• 代理公司: 廣州弘邦專利商標事務(wù)所有限公司
• 代理人: 張樹藩

【技術(shù)領(lǐng)域】

本發(fā)明涉及一種微生物顯色培養(yǎng)基、檢測試劑盒及檢測方法，屬于食品微生物安全監(jiān)測領(lǐng)域。

【背景技術(shù)】

“民以食為天”，食品是人類賴以生存的物質(zhì)基礎(chǔ)，食品安全是關(guān)系人類健康和社會發(fā)展的重大問題。近年來，國內(nèi)外食品安全的惡性事件不斷發(fā)生。食源性致病菌是指以食物為載體，導(dǎo)致人類發(fā)生疾病的一大類細菌。據(jù)統(tǒng)計，發(fā)達國家每年約有1/3的人患食源性疾病，美國每年約有7600萬例食源性疾病患者，全世界每年約有220萬人因患食源性疾病而喪生，而且，食源性疾病常常是發(fā)展中國家導(dǎo)致人非正常死亡的主要原因。由此可見，食源性疾病已成為國內(nèi)外普遍關(guān)心的問題。

沙門氏菌(Salmonella)是人類常見的重要食源性致病菌之一，是人和動物腸道中最主要且數(shù)量最多的正常棲居菌，嬰兒出生后即隨哺乳進入腸道，與人終身相伴，正常棲居條件下不致病。但若進入膽囊、膀胱等處可引起感染，如腹膜炎、膽囊炎、膀胱炎及腹瀉等。

為有效控制病原的發(fā)生和擴散，準確及時的檢測手段是預(yù)防和控制沙門氏菌傳播的關(guān)鍵。目前，沙門氏菌傳統(tǒng)的檢測方法需要分離培養(yǎng)、鏡檢觀察、生化鑒定等多個步驟，檢測周期長，整個過程大約4-7天，且操作復(fù)雜，已不能滿足食品中病源菌快速檢測的現(xiàn)實需要，而且當有其它的腸道菌群存在時會影響沙門氏菌在傳統(tǒng)SS培養(yǎng)基和DHL培養(yǎng)基中的檢出。近年來，快速檢驗法中的PCR法、金標試紙法、免疫法和特異性的顯色生化鑒定技術(shù)等快速檢驗方法，已在不斷得到擴大應(yīng)用，使沙門氏菌的快速檢測有了很大發(fā)展。但是這些技術(shù)也存在一定缺陷，如技術(shù)要求高，設(shè)備操作復(fù)雜，需要專業(yè)的技術(shù)人員進行操作，以及檢測費用昂貴等。

針對以上不足，以顯色培養(yǎng)基為基礎(chǔ)的特異性顯色生化鑒定技術(shù)在當前能更好地與傳統(tǒng)方法相接軌，檢測成本較低。顯色生化鑒定技術(shù)的原理是使用適當?shù)娘@色底物，在細菌特異性酶作用下，顯示一定顏色，直接觀察菌落顏色的快速分析法，可以把檢測、計數(shù)和鑒定一次完成。應(yīng)用顯色酶底物來檢測微生物專一性和特異性的方法，推動了食源性致病菌的鑒定以及早期篩選培養(yǎng)基一系列技術(shù)的發(fā)展。這些基于酶的試驗方法具有簡便、快速、準確和檢出率高的優(yōu)點，在臨床診斷及食品微生物檢驗中，顯色培養(yǎng)基以其獨具的優(yōu)勢與傳統(tǒng)的培養(yǎng)基展開了競爭，從而引發(fā)了顯色培養(yǎng)基開發(fā)和應(yīng)用的熱潮。國外的顯色培養(yǎng)基研究起步很早。目前法國CHROMagar公司、意大利的Biolife公司、英國的Biolog公司和法國的BioMerieux公司已開發(fā)出沙門氏菌顯色培養(yǎng)基，但是這些進口顯色培養(yǎng)基價格昂貴，檢測成本很高，且購買不方便，國內(nèi)一般基層機構(gòu)和企業(yè)很少采用。

【發(fā)明內(nèi)容】

本發(fā)明旨在針對傳統(tǒng)方法的不足，提供一種特異性高、檢測周期短、成本低、可操作性強，適用于處理大通量樣本的沙門氏菌顯色培養(yǎng)基、檢測試劑盒及檢測方法。

所述的沙門氏菌顯色培養(yǎng)基，其配方為：蛋白胨20～30g、酵母膏粉3～7g、氯化鈉4～7g、膽鹽0.1～0.5g、瓊脂12～15g、混合顯色底物M-galactoside?0.05～0.95g、Na₂CO₃?0.02～0.04g、選擇性添加劑0.01～0.05g。

上述顯色培養(yǎng)基優(yōu)選的配方為：蛋白胨25.6g、酵母膏粉3g、氯化鈉5g、膽鹽0.1g、瓊脂13g、混合顯色底物M-galactoside?0.75g、Na₂CO₃?0.02g、選擇性添加劑0.03g。

所述的沙門氏菌檢測試劑盒，其組成為：上述沙門氏菌顯色培養(yǎng)基、增菌液A和B。

其中，增菌液A為高壓滅菌處理后的緩沖蛋白胨水培養(yǎng)基(BP)；

增菌液B為高壓滅菌處理后的四硫磺酸鈉煌綠增菌液(TTB)。

所述的沙門氏菌檢測方法，其具體步驟為：

(1)制備顯色平板：每1000mL蒸餾水或去離子水中加入42～60g顯色培養(yǎng)基干粉，攪拌加熱煮沸至完全溶解，待冷至40～50℃，倒平板，備用；

(2)樣品前處理：按國標法(GB/T?4789.4-2003)對食品樣品進行前處理；

(3)一步增菌(非選擇性增菌)：將處理過的樣品25g置于225mL增菌液A中，混合均勻后37℃培養(yǎng)6～8h；

(4)二步增菌(選擇性增菌)：取一步增菌液1mL加入到9mL增菌液B中，混合均勻后37℃培養(yǎng)18～24h；

(5)接種培養(yǎng)：將二步增菌液接種顯色平板上，37℃培養(yǎng)18～24h；