[發明專利]高密度蛭弧菌游泳體的發酵培養技術

無效

• 申請號: 200710031166.X
• 申請日: 2007-10-30
• 公開（公告）號: CN101173231A
• 公開（公告）日: 2008-05-07
• 發明（設計）人: 蔡俊鵬;王澤秀
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司
• 代理人: 盛佩珍

1.高密度蛭弧菌游泳體的發酵培養技術，其特征在于：該技術的步驟及其工藝條件如下：

步驟一：宿主菌懸浮液的制備：

將宿主菌接種于常規培養基中，置于20～40℃搖床中培養12～24h，使其處于對數生長期，培養液在2～15℃，5000～8000rpm離心15～40min，保留沉淀棄去上清液，往沉淀中加入與其體積比為0.05～2％稀營養肉湯DNB培養液，即得到濃度達10¹⁸～10²⁶CFU/mL的宿主菌懸浮液，然后置于2～15℃冰箱中保存備用；

步驟二：蛭弧菌游泳體濃縮液的制備：

在稀營養肉湯DNB培養液中先加入步驟一制備的宿主菌懸浮液，使宿主菌在DNB液體中的濃度達10¹⁰～10¹⁸CFU/mL，再接入用常規方法培養出來的蛭弧菌斑，然后將此培養液在20～40℃培養20～60h，再在2～15℃，5000～8000rpm離心15～40min，保留上清液棄去沉淀，將上清液再在2～15℃，10000～20000rpm離心15～40min，保留沉淀棄去上清液，沉淀為蛭弧菌游泳體，往沉淀中加入與其體積比為0.05～2％DNB培養液，混勻即得到濃度達10⁶～10⁸PFU/mL蛭弧菌游泳體濃縮液，然后將此濃縮液置于2～15℃冰箱保存備用；

步驟三：高密度蛭弧菌游泳體的發酵培養工藝：

配制大量稀營養肉湯DNB培養液，并加入經纖維素濾膜過濾處理后的谷氨酸鈉溶液，使谷氨酸鈉溶液在培養液中的濃度達0.05～10mM，再接入步驟一制得的宿主菌懸浮液，使宿主菌起始濃度達10¹⁰～10¹⁸CFU/mL，然后接入步驟二制備的蛭弧菌游泳體濃縮液，使混合培養液中的蛭弧菌起始濃度達1～10³pFU/mL后，裝入發酵罐，于20～40℃進行常規發酵培養，培養過程中至少加兩次宿主菌，每次間隔18～30h，并保證每次的培養液中宿主菌濃度達10¹⁰～10¹⁸CFU/mL，發酵培養4～6天后，即可得到濃度達10⁸～10¹⁴pFU/mL的蛭弧菌發酵液，最后將此發酵液先在2～15℃，5000～8000rpm離心15～40min，棄去沉淀，保留上清液，上清液再在2～15℃，10000～20000rpm離心15～40min，保留沉淀棄去上清液，往沉淀中加入與其體積比為0.05～2％稀營養肉湯DNB培養液混勻，即得到蛭弧菌游泳體發酵濃縮液。

2.根據權利要求1所述的高密度蛭弧菌游泳體的發酵培養技術，其特征在于；步驟一所述的宿主菌懸浮液的制備中工藝條件為：將宿主菌接種于營養肉湯培養基中，置于28～32℃搖床中培養14～16h，使其處于對數生長期，培養液在4～5℃，5500～6500rpm離心18～25min，保留沉淀棄去上清液，往沉淀中加入與其體積比為0.1～0.5％稀營養肉湯DNB培養液。

3.根據權利要求1所述的高密度蛭弧菌游泳體的發酵培養技術，其特征在于：步驟三所述的高密度蛭弧菌游泳體的發酵培養工藝，發酵培養5天，前3天每間隔24h加一次宿主菌，共加三次，使宿主菌在培養液中的濃度維持在10¹⁰～10¹⁸CFU/mL，然后繼續發酵培養至滿5天，即得到最終濃度為10⁸～10¹⁴PFU/mL的蛭弧菌發酵液。

4.根據權利要求1或3所述的高密度蛭弧菌游泳體的發酵培養技術，其特征在于：步驟三所述培養液中谷氨酸鈉的濃度為0.5～1mM。

5.根據權利要求1或2或3所述的高密度蛭弧菌游泳體的發酵培養技術，其特征在于：所述宿主菌是指：可被蛭弧菌裂解的各種弧菌、大腸桿菌、氣單胞菌、沙門氏菌、綠膿桿菌、假單胞菌或愛德華菌類致病菌菌株。