[發(fā)明專利]一種鼠免疫狀態(tài)監(jiān)測(cè)試劑及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200710031075.6
• 申請(qǐng)日: 2007-10-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101149371A
• 公開(kāi)（公告）日: 2008-03-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫爾維;蔣澤生;高毅;潘明新;王海瀾;袁小澎;馬聰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院
• 主分類號(hào): G01N33/49
• 分類號(hào): G01N33/49;G01N15/00
• 代理公司: 廣州市天河廬陽(yáng)專利事務(wù)所
• 代理人: 胡濟(jì)元

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)用配置品，具體涉及來(lái)源于動(dòng)物材料的醫(yī)用配置品。

背景技術(shù)

移植排斥反應(yīng)(transplantation?rejection)是由移植抗原誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答所導(dǎo)致的移植物功能喪失或受者機(jī)體損害，是臨床移植失敗的主要原因和移植免疫學(xué)所致力克服的關(guān)鍵難題。在同種移植中，即使外科手術(shù)十分成功，移植物也會(huì)因排斥反應(yīng)而不能長(zhǎng)期存活。因此，移植排斥一直是醫(yī)學(xué)界研究的重點(diǎn)，在移植排斥的研究過(guò)程中，受體免疫狀態(tài)檢測(cè)是必不可少的環(huán)節(jié)。但是目前仍然沒(méi)有一種可靠的試劑/方法可以檢測(cè)受體免疫狀態(tài)，現(xiàn)有的受體免疫狀態(tài)檢測(cè)的主要是通過(guò)檢測(cè)一些免疫學(xué)指標(biāo)間接反映免疫狀態(tài)，均存在不同缺陷。

常用檢測(cè)指標(biāo)有以下幾種：

1、外周血T細(xì)胞計(jì)數(shù)。研究表明，CD4/CD8比值同移植排斥反應(yīng)有關(guān)。排斥反應(yīng)往往發(fā)生于CD4/CD8比值低下的患者中，用單克隆抗體免疫熒光法或流式細(xì)胞儀測(cè)定T細(xì)胞及其亞群，在急性排斥的臨床癥狀出現(xiàn)前，T細(xì)胞總數(shù)和CD4/CD8比值升高，而巨細(xì)胞病毒感染時(shí)比值降低；各家報(bào)道的比值不同，一般認(rèn)為當(dāng)比值大于1.2時(shí)，預(yù)示急性排斥即將發(fā)生；比值小于1.08則感染的可能性很大。如果能進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，對(duì)急性排斥和感染的鑒別診斷會(huì)有重要價(jià)值。然而，也有一些學(xué)者認(rèn)為，CD4/CD8比值與排斥反應(yīng)沒(méi)有直接關(guān)系，不同的研究結(jié)果爭(zhēng)執(zhí)不下源于CD4和CD8亞群的種型多樣性(heterogeneity)。例如：CD8可分為抑制型和細(xì)胞毒型，還有部分NK細(xì)胞亦表達(dá)CD8抗原。同樣，CD4也可根據(jù)CD29和CD45的表達(dá)分為成熟型和初始型，既使是區(qū)分了各種亞型，CD4、CD8同移植排斥反應(yīng)的關(guān)系仍不明顯，還有待于進(jìn)一步研究。

2、殺傷細(xì)胞CTL和NK細(xì)胞活性測(cè)定。移植后因免疫抑制劑的應(yīng)用，殺傷細(xì)胞的活性受抑制，但在急性排斥前會(huì)明顯增高。目前常用的方法為體外試驗(yàn)，取供者淋巴細(xì)胞滅活后作為刺激細(xì)胞，分離受者淋巴細(xì)胞作反應(yīng)細(xì)胞，將兩種細(xì)胞混合直接做單向混合淋巴細(xì)胞試驗(yàn)，測(cè)得的結(jié)果是Tc細(xì)胞和NK細(xì)胞共同作用的結(jié)果。

3、MHC分子檢測(cè)。器官移植排斥反應(yīng)所識(shí)別的靶抗原主要是表達(dá)于移植物細(xì)胞表面的MHC分子。MHC分子可通過(guò)直接途徑和間接途徑被受者T細(xì)胞識(shí)別，它在器官移植排斥反應(yīng)中有重要的作用。MHC分子在體內(nèi)廣泛分布，人體中MHC有2種形式：一是以膜抗原形式存在于幾乎所有組織細(xì)胞表面，二是以可溶形式存在于血清、尿液、精液、乳汁、唾液等多種體液與分泌液中。血清可溶性MHC分子檢測(cè)比較方便，用ELISA檢測(cè)血清可溶性HLA-抗原水平，可提示排斥反應(yīng)。目前血清可溶性MHC分子檢測(cè)在國(guó)內(nèi)應(yīng)用較多。相對(duì)于血清可溶性MHC分子，外周血單個(gè)核細(xì)胞表面MHC分子受到外界影響較小。外周血單個(gè)核細(xì)胞在移植術(shù)后發(fā)生排斥時(shí)，表面表達(dá)MHC分子水平增高，目前研究的主要是MHC-II分子。細(xì)胞表面MHC分子的檢測(cè)還不成熟，流式細(xì)胞術(shù)是應(yīng)用較早的方法，分子生物學(xué)方法特別是熒光實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)的應(yīng)用使細(xì)胞表面MHC分子的檢測(cè)應(yīng)用日漸廣泛。在人類HLA-DR作為T(mén)淋巴細(xì)胞的活性化標(biāo)志，排斥反應(yīng)發(fā)生時(shí)HLA-DR陽(yáng)性化T淋巴細(xì)胞增加，而近期也有文獻(xiàn)指出HLA-DQ陽(yáng)性化單核細(xì)胞增加可以作為移植急性排斥反應(yīng)早期診斷的有效性指標(biāo)。但人類末梢血中的單核細(xì)胞幾乎都是HLA-DR、HLA-DQ，作為抗原提呈細(xì)胞在機(jī)能成熟的過(guò)程中CD80、CD86、CD40等為先導(dǎo)，HLA-DR表現(xiàn)在細(xì)胞表面，所以一部分學(xué)者認(rèn)為以此作為免疫應(yīng)答初期階段的指標(biāo)是比較合理的。