[發明專利]一種新的重組蛇毒金屬蛋白酶的表達、復性及其生物學活性無效
| 申請號： | 200710030709.6 | 申請日： | 2007-09-30 |
| 公開（公告）號： | CN101397567A | 公開（公告）日： | 2009-04-01 |
| 發明（設計）人： | 向開軍 | 申請（專利權）人： | 向開軍 |
| 主分類號： | C12N15/57 | 分類號： | C12N15/57;C12N9/64 |
| 代理公司： | 廣州市深研專利事務所 | 代理人： | 陳雅平 |
| 地址： | 510000廣東省*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 重組 蛇毒 金屬 蛋白酶 表達 復性 及其 生物學 活性 | ||
【權利要求書】：
1、一種新的重組蛇毒金屬蛋白酶基因，其特征在于：是具有序 列1的核苷酸或堿基序列；該序列前面330個堿基來自巴西蛇毒金屬 蛋白酶cDNA的5’端編碼序列，后面285個堿基來自中國皖南尖吻 蝮蛇毒金屬蛋白酶cDNA的3’端編碼序列。
2、根據權利要求1所述的重組蛇毒金屬蛋白酶基因，其特征在 于：用表達載體pET-15b在大腸桿菌中以包涵體的形式表達了該重組 蛇毒金屬蛋白酶；經體外復性后，該重組蛋白酶具有明顯的蛋白水解 活性。
3、根據權利要求1或2所述重組蛇毒金屬蛋白酶基因在大腸桿 菌中的表達、復性及其活性測定方法，其特征在于包括以下步驟：
(a)以巴西蛇毒金屬蛋白酶基因與皖南尖吻蝮蛇毒金屬蛋白酶 基因為模板或材料，通過PCR(聚合酶鏈式反應)技術構 建了由這兩種蛇毒金屬蛋白酶基因片段組成的重組(或嵌 合)蛇毒金屬蛋白酶基因；
(b)在大腸桿菌中以包涵體的形式表達了該重組蛇毒金屬蛋白 酶，以及包涵體的純化過程；
(c)重組蛇毒金屬蛋白酶包涵體的溶解和重組蛇毒金屬蛋白酶 的體外復性過程；
(d)重組蛇毒金屬蛋白酶的蛋白水解活性測定。
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