[發(fā)明專利]基質(zhì)金屬蛋白酶導(dǎo)向性重組人腫瘤壞死因子融合蛋白及制備

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200710028037.5
• 申請(qǐng)日: 2007-05-11
• 公開（公告）號(hào): CN101302255A
• 公開（公告）日: 2008-11-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃迪南;侯敢
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣東醫(yī)學(xué)院
• 主分類號(hào): C07K19/00
• 分類號(hào): C07K19/00;C12N15/70;C12N15/62
• 代理公司: 湛江市三強(qiáng)專利事務(wù)所
• 代理人: 龐愛英

1.一種基質(zhì)金屬蛋白酶導(dǎo)向性重組人腫瘤壞死因子融合蛋白，其特征在 于：融合蛋白的氨基酸序列由三部分組成：從N-端開始依次為膠原蛋白序列、 人基質(zhì)金屬蛋白酶底物序列和人腫瘤壞死因子-α序列，其氨基酸序列是SEQ? ID?NO.5、SEQ?ID?NO.6、SEQ?ID?NO.7和SEQ?ID?NO.8所示的任一氨基酸序 列。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白能被 MMP-1和MMP-8酶切。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白經(jīng)與融 合蛋白底物序列相一致的基質(zhì)金屬蛋白酶酶切后，分子量由20KDa轉(zhuǎn)變?yōu)? 17KDa和3KDa二部分，起到去除人腫瘤壞死因子-α受體結(jié)合部位封閉的效 果，其體外TNF-α樣活性顯著增高。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白含有 MMP-2和MMP-9識(shí)別的氨基酸序列，對(duì)HO8910卵巢癌細(xì)胞有殺傷作用。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的融合蛋白的編碼基因，其特征在于：是SEQ?ID? NO.1、SEQ?ID?NO.2、SEQ?ID?NO.3和SEQ?ID?NO.4所示的任一DNA序列。

6.含有權(quán)利要求5所述的編碼基因的表達(dá)型重組載體。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的表達(dá)型重組載體，其特征在于：其為 pET-32a(+)-collagen-MMP?1，8a-hTNF、pET-32a(+)-collagen-MMP?1，8b-hTNF、 pET-32a(+)-collagen-MMP2，9a-hTNF或pET-32a(+)-collagen-MMP2，9b-hTNF。

8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的表達(dá)型重組載體，其特征在于：其為誘導(dǎo) 型表達(dá)重組載體，通過IPTG誘導(dǎo)表達(dá)所述的融合蛋白。

9.含有權(quán)利要求6所述的表達(dá)型重組載體的工程菌，其特征在于：用所 述的表達(dá)型重組載體轉(zhuǎn)化λDE3大腸桿菌。