[發(fā)明專利]一種利用親和層析法分離純化纖溶酶的方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 200710027907.7 | 申請日： | 2007-04-30 |
| 公開（公告）號： | CN101067131A | 公開（公告）日： | 2007-11-07 |
| 發(fā)明（設計）人： | 郭勇;崔堂兵;劉柳 | 申請（專利權(quán)）人： | 華南理工大學 |
| 主分類號： | C12N9/68 | 分類號： | C12N9/68;B01D15/08 |
| 代理公司： | 廣州粵高專利代理有限公司 | 代理人： | 何淑珍 |
| 地址： | 510640廣東*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 利用 親和 層析 分離 化纖 方法 | ||
1.一種利用親和層析分離純化纖溶酶的方法，其特征在于包括如下步驟和工藝條件：
(1)親和層析介質(zhì)的制備，包括如下步驟：
a.將人血纖維蛋白原溶于無菌水中，35～40℃保溫直至完全溶解，溶解后濃度為50～100mg/mL；
b.將瓊脂糖溶于pH7.6～8.2的巴比妥納-HCl緩沖液中，配制成質(zhì)量濃度為1.2～1.8％的溶液，滅菌后冷卻至48～52℃；
c.將步驟b配置的溶液與步驟a已經(jīng)溶解的纖維蛋白原溶液混合，加入4～10IU/mL的人凝血酶，混合均勻，保溫20～40分鐘；
d.將步驟c的混合液用注射器滴入預冷至2～10℃的四氯乙烯中，制成球形顆粒；
e.取出球形顆粒，用無離子水清洗，于35～40℃保溫1～2h；
f.往所述球形顆粒中加入質(zhì)量濃度為3～5％的戊二醛作為交聯(lián)劑進行交聯(lián)固定，用無離子水清洗后于2～10℃保存?zhèn)溆茫?/p>
(2)親和層析：
將步驟(1)f制備好的親和層析介質(zhì)裝進層析柱；在溫度為2-10℃的條件下，用pH7.6～8.0的緩沖液平衡層析柱，再加入含有纖溶酶的樣品液；然后用pH7.6～8.0的緩沖液沖洗，去除雜質(zhì)；最后用pH5.2～5.8的洗脫液洗脫，收集洗脫液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用親和層析分離純化纖溶酶的方法，其特征在于所述步驟e是在37℃條件下保溫1～2h。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用親和層析分離純化纖溶酶的方法，其特征在于所述步驟(2)親和層析溫度為4～6℃。
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