[發明專利]HLA－B27磁性酶聯免疫試劑盒及其制備方法

有效

• 申請號: 200710027823.3
• 申請日: 2007-04-29
• 公開（公告）號: CN101294957A
• 公開（公告）日: 2008-10-29
• 發明（設計）人: 郭志程
• 申請（專利權）人: 郭志程
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/535
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司
• 代理人: 曾旻輝

技術領域

本發明屬于醫療器械領域，具體地是涉及一種HLA-B27磁性酶聯免疫試劑盒及其制備 方法。

背景技術

強直性脊椎炎(ankylosing?spondylitis，AS)是一種結締組織疾病，在人群中的患病率 為0.2％-0.4％，發病年齡大多在30歲以內，占65％。平均病程4-6年。主要癥狀是腰、骶 及下肢關節疼痛。常伴有晨僵、夜間重、活動后輕等特點。與成年人的AS不同，青少年AS 在發病初期引起骨骼病變的癥狀出現較少，可能有24％的兒童主訴四肢關節痛或只有足跟痛， 但末梢關節病變表現已很明顯。AS主要表現為椎間盤纖維環和纖維環附近結締組織的骨化、 椎間關節和四肢關節滑膜的炎癥和增生。晚期患者脊柱僵硬呈板狀，活動受限。晚期致殘率 高。因而早期診斷、治療具有重要意義。

人類白細胞抗原(humanleukocyte?antigen，HLA)是白細胞膜上的一種同種抗原，依不同 的位點編碼，具有重要的生理功能。早在1973年，Brewerton等報道了HLA—B27與強直性 脊柱炎(ankylosing?spondylitis，AS)強相關。在AS患者中，88％—96％的患者具有HLA-B27 抗原，而正常對照組中具有B27抗原者僅為4％-8％。相對危險率達90％。

盡管HLA—B27與強直性脊柱炎有很強的相關性，但查出HLA—B27陽性并不能確診為 強直性脊柱炎，HLA—B27是強直性脊柱炎的一個易發病的因素。

HLA-B27檢測不能作為血清學陰性脊柱關節病的確診指標，但在以下幾個方面將有助于 診斷：

1如果癥狀和體征提示脊柱關節病變發生的可能性超過50％，那么B27抗原陽性顯著增加正 確診斷的機會。

2背痛及強直的患者，B27抗原陰性強烈提示患有其他疾病。在不伴有牛皮癬及炎癥性小腸 病變時，B27抗原陰性可排除AS診斷。

3患有炎癥性關節病變的青少年，B27抗原陽性可提示，可能會發生血清學陰性脊柱關節病 變。

4預測AS患者家庭成員發生AS的可能性。如果某成員攜帶有與AS相關的單倍型，尤其是 男性，則預示其發病的可能性較大，為20％-30％，不帶有該單倍型者，發病的可能性極小， 幾乎為0。

早期檢測HLA-B27抗原的方法是微量淋巴細胞毒試驗(microlymphocytotoxicity?test， MLCT)。該方法費時費力，現已逐漸被流式(flow?cytometry，FC)所取代。但FC價格昂貴， 操作復雜。最近，又發展了以PCR為基礎的方法，雖然該方法準確性高，但不適合做大樣本 快速篩查。

酶標免疫磁性抗體分離檢測技術(Magnetic?Anti—body?Immu no?Assay?MAIA)是一項高靈敏度的酶免技術，其檢測靈敏度可達到放射免疫法 的水平。它將免疫磁性微珠分離技術引入酶聯免疫測定領域。磁性微珠連接的單克隆抗體與 相應的標本抗原結合后，在磁力的作用下，特異性結合的抗原與其它物質分離，再通過酶聯 免疫顯色反應，測定其含量。迄今為止，還未有人將該技術應用到HLA-B27抗原檢測。

發明內容

本發明需要解決的技術問題之一是提供一種HLA-B27磁性酶聯免疫試劑盒，該試劑盒 建立在磁性免疫分離和酶檢測原理上，具有快速、簡單、準確性高等優點。

解決上述技術問題的技術內容為：

一種HLA-B27磁性酶聯免疫試劑盒，主要包括酶稀釋液，酶結合物，還包括有：

包被有與HLA-B27抗體共價耦聯免疫磁性微珠的微孔板板條。

優選地，所述酶結合物為耦聯有抗CD45抗體的HRP，即抗CD45酶結合物。

HLA-B27抗體與抗CD45酶結合物的稀釋度為1：50。

該試劑盒還包括有，HRP耦聯HLA—B27抗體分子的陽性對照。

酶稀釋液優選為加有1％BSA(小牛血清白蛋白)、0.1％Proclin300的0.01M?PBS緩沖 液。

本發明所述HLA-B27磁性酶聯免疫試劑盒用于檢測EDTA-K3(乙二胺四乙酸三鉀)作 為抗凝劑的全血標本。

本發明的另一需要解決的技術問題是提供上述HLA-B27磁性酶聯免疫試劑盒的制備方 法。

一種HLA-B27磁性酶聯免疫試劑盒的制備方法，主要包括以下步驟：