[發明專利]用單一特異性捕獲劑定量檢測分析物的新方法

無效

• 申請號: 200710025571.0
• 申請日: 2007-08-02
• 公開（公告）號: CN101358969A
• 公開（公告）日: 2009-02-04
• 發明（設計）人: 孫東旭;斯蒂芬·諾克
• 申請（專利權）人: 孫東旭
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/68;G01N33/577
• 代理公司: 徐州市三聯專利事務所
• 代理人: 周愛芳

1、一種用單一特異性捕獲劑定量檢測分析物的方法，其特征在于：

(1)捕獲分析物：將特異性捕獲劑包被到固相表面，成為捕獲裝置；加入待測生物樣本，使捕獲裝置上的特異性捕獲劑與樣本中的分析物結合，形成捕獲劑-分析物復合物；

(2)標記復合物：用標記試劑標記捕獲劑-分析物復合物；

(3)洗脫分析物：將經過標記的分析物從復合物上洗脫下來；

(4)再捕獲：將洗脫的分析物中和后加入檢測裝置，由檢測裝置上的第二捕獲劑通過與標記分子的結合而再次將分析物捕獲。所說的檢測裝置是指包被了第二捕獲劑的固相表面；

(5)檢測：加入特異檢測劑，和分析物特異性結合，通過檢測特異檢測劑上攜帶的報道分子產生的信號強度來確定分析物濃度。

2、根據權利要求1所述的定量檢測方法，其特征在于：其中所說的特異捕獲劑是抗體、抗體片段、非抗體類蛋白質、肽、寡聚核苷酸或小分子化合物。

3、根據權利要求1所述的定量檢測方法，其特征在于：其中所說的第二捕獲劑是能夠與所說的標記分子結合的物質，包括但不限于親和素或鏈親和素、抗體、或其他蛋白質。

4、根據權利要求1所述的定量檢測方法，其特征在于：其中所說的特異檢測劑是標有報道分子的特異捕獲劑；特異檢測劑和特異捕獲劑與分析物的同一個位點結合，二者的不同是前者攜帶報道分子而后者不攜帶報道分子。

5、根據權利要求1所述的定量檢測方法，其特征在于：其中所說的分析物是能與所說的捕獲劑特異性結合的抗原蛋白質、抗體、肽、寡聚核苷酸適體、其他生物大分子及其復合物、小分子以及亞細胞結構。

6、根據權利要求1所述的定量檢測方法，其特征在于，所說的標記試劑是能夠將標記分子標記到分析物上的試劑；所說的標記分子是最好是生物素；其他可以作為標記分子的化合物包括：各類半抗原小分子、肽、或寡聚核苷酸。

7、根據權利要求1所述的定量檢測方法，其特征在于：其中所說的報道分子是熒光分子、生物素、半抗原小分子、酶、或寡聚核苷酸。

8、根據權利要求1所述的定量檢測方法，其特征在于，其中所說的捕獲裝置的固相表面是試管、微量板、濾膜、可以結合蛋白質測試紙或微珠；所說的檢測裝置的固相表面為微量板、濾膜、測試紙、微珠、玻璃或塑料薄片載體。

9、權利要求1所述的定量檢測方法，在臨床檢測診斷、生物標記鑒定分析、分子生物學和細胞生物學研究、蛋白質組學研究分析、新藥靶位鑒定分析、臨床藥物動力學和藥效學分析領域的應用。

10、一種用于權利要求1所說的用單一特異性捕獲劑定量檢測分析物的方法的試劑盒，其特征在于，包括捕獲裝置、檢測裝置，標記試劑、分析物中和液與洗脫液、標記有報道分子的特異檢測劑、使報道分子顯示信號的試劑、分析物標準樣品、用法說明等。

11、根據權利要求10所述的試劑盒，其特征在于，所說的捕獲裝置是包被著特異性單克隆抗體的96-孔微量板；所說的檢測裝置是包被著鏈親和素的96-孔微量板；所說的標記試劑是能夠將生物素連接到分析物上的試劑，例如NHS-生物素；所說的標記有報道分子的特異檢測劑是由用于包被捕獲裝置的特異性單克隆抗體連接上報道分子而產生。

12、根據權利要求10和11所述的試劑盒，其特征在于，所說的報道分子標記的特異檢測劑是用辣根過氧化物酶標記的特異性單克隆抗體，所說的使報道分子顯示信號的試劑包括但不限于辣根過氧化物酶底物和反應終止溶液。

13、根據權利要求10和11所述的試劑盒，其特征在于，所說的報道分子標記的特異檢測劑是用一種半抗原小分子或肽標記的特異性單克隆抗體；所說的使報道分子顯示信號的試劑包括但不限于能夠與所說的半抗原小分子或肽特異性結合的酶聯二級抗體、酶的底物、反應終止溶液等。。

14、根據權利要求10和11所述的試劑盒，其特征在于，所說的報道分子標記的特異檢測劑是用寡聚核苷酸標記的特異性單克隆抗體。

15、根據權利要求10和11所述的試劑盒，其特征在于，所說的報道分子標記的特異檢測劑是用熒光化合物標記的特異性單克隆抗體。