[發明專利]硫酸銨梯度法－薄膜蒸發法制備鹽酸小檗堿長循環脂質體的方法

無效

• 申請號: 200710025536.9
• 申請日: 2007-08-03
• 公開（公告）號: CN101108167A
• 公開（公告）日: 2008-01-23
• 發明（設計）人: 安學勤;朱琨
• 申請（專利權）人: 南京師范大學
• 主分類號: A61K9/127
• 分類號: A61K9/127;A61K31/4375;A61K47/24
• 代理公司: 南京知識律師事務所
• 代理人: 栗仲平

技術領域

本發明屬于智能藥物載體技術領域，具體涉及一種綜合利用硫酸銨梯度法、薄膜蒸發法制備鹽酸小檗堿長循環脂質體的方法。

背景技術

脂質體(liposomes)是由脂質雙分子層構成的內部為水相的封閉囊泡。這種由磷脂質雙層(phosphocid?bilayers)結構組成的脂質體(liposomes)在結構上交替間隔著水層和磷脂質雙層，可以包埋親水性或親脂性的物質。脂質體作為一種智能藥物載體得到越來越多的關注，具有優良的靶向性、生物相容性和提高藥物穩定性、治療指數以及降低藥物毒性等優點。脂質體進入人體循環系統后，因血液中的蛋白、調理素等的作用，易發生破裂，包封的藥物快速滲漏，被網狀內皮組織系統(RES)識別吸收，從而降低了應用價值。于是，人們致力于研究長循環脂質體。通過在脂質體的成分中加入一定比例的糖脂或在磷酸分子上聯接含多羥基團的物質(如聚乙二醇PEG)，使脂質體表面暴露出一些親水性的多羥基基團等方式，減少與血漿中蛋白、調理素的作用，從而增加其在血液中的穩定性。

目前，制備脂質體的方法頗多，傳統的成熟的被動載藥方法有為薄膜蒸發法、逆相蒸發法、溶劑注入法等。近年來，由于脂質體主動載藥的發展，大大改善了被動載藥制得的脂質體包封率都不高、包封條件不易掌握、包封率差異較大等缺點；主動載藥法特別是用硫酸銨梯度法制備生物堿類藥物的脂質體。硫酸銨梯度法是利用硫酸銨水溶液作為水相。當脂質體雙分子膜內的硫酸銨濃度遠遠大于外水相中的硫酸銨濃度時，內水相中的銨離子(NH₄⁺)解離為氨分子(NH₃)。由于NH₃跨膜速率遠遠大于SO₄^2-，且NH₃和SO₄^2-的滲透系數(P)也有很大的差異，所以當一個NH₃離開脂質體內部時，就會在脂質體的內水相中留下一個H⁺，從而建立起一個硫酸銨梯度，同時產生一個pH梯度，使藥物逆硫酸銨梯度載入脂質體，可制備出相對較高包封率的脂質體。

發明內容

本發明的目的是提供一種硫酸銨梯度法結合薄膜蒸發法制備鹽酸小檗堿長循環脂質體的方法，此方法是綜合利用以上的現有技術，創建的一種新的主動復合被動載藥的方法，以制備鹽酸小檗堿長循環脂質體。本發明將解決藥物載體中存在的兩個主要問題：1、提高脂質體藥物的包封率；2、提高脂質體藥物載體的穩定性。

完成上述任務本發明的技術方案是，硫酸銨梯度法-薄膜蒸發法制備鹽酸小檗堿長循環脂質體的方法，步驟如下：

1).將蛋黃卵磷脂(EPC)，以及1/2.5-1/3.5蛋黃卵磷脂質量的膽固醇(CH)，以及1/20-1/5蛋黃卵磷脂質量的聚乙二醇2000(PEG2000)溶于適量無水乙醇中，直至形成黃色透亮溶液；

2).減壓回收乙醇，在容器壁形成膜；注入硫酸銨溶液，使得膜材溶解；水化1h～2h；

3).然后以蒸餾水為透析介質，透析15～20h，制造硫酸銨梯度，得空白脂質體；

4).在空白脂質體中加入鹽酸小檗堿溶液；

5).在30℃～60℃孵化10～60分鐘；

6).然后取孵化后的溶液，以蒸餾水為透析外液，在4℃～37℃透析12h，透析到外液無色透明；把透析液轉移至容量瓶中定容，即可獲得包封率高，穩定，粒徑均勻的長循環脂質體。

以上所述的無水乙醇的“適量”，是以能夠完全溶解為度；

所述的“在30℃～60℃孵化10～60分鐘”，推薦采用60℃下孵化10分鐘；

所述的硫酸銨溶液的濃度為1.0ml·l^-1～2.5ml·l^-1；可以分別是1.0、1.5、2.0、2.5ml·l^-1；硫酸銨溶液的加入量以膜材完全溶解為度；本申請推薦采用的濃度為2.5ml·l^-1；推薦采用的加入量為25ml硫酸銨溶液/50～500mgEPC；

本申請推薦的透析溫度為4℃。

更具體和更優化地說，本發明的綜合利用硫酸銨梯度法-薄膜蒸發法制備鹽酸小檗堿長循環脂質體的方法，具體操作步驟是：