[發明專利]阻斷NR2B信號通路的多肽類似物及其制備方法和藥物用途

無效

• 申請號: 200710025006.4
• 申請日: 2007-07-09
• 公開（公告）號: CN101134780A
• 公開（公告）日: 2008-03-05
• 發明（設計）人: 朱東亞;徐進署;江君;羅春霞;朱明媚;吳海銀
• 申請（專利權）人: 南京醫科大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C07K14/155;A61K38/16;A61P25/00
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(一)技術領域

在醫學的神經生物學領域，通常可以使用針對受體的肽類阻斷劑治療神經性疾病。本發明涉及一種多肽類似物的方法，特別是一種阻斷NMDA受體和PSD-95蛋白質之間信號轉導的多肽類似物的分子設計和制備方法。

(二)技術背景

N-甲基-D-天門冬氨酸(NMDA)受體是一種門控離子通道復合物，作為興奮性氨基酸受體之一，主要分布于大腦皮層、海馬、紋狀體等部位，是興奮性氨基酸遞質傳遞的重要基礎，同時是維持中樞神經系統功能正常的關鍵因素。在生理狀態下，NMDA受體不僅介導了突觸可塑性，神經元生長和分化，還通過突觸后的信號調控突觸的去極化以維持一定的生理功能。盡管興奮性氨基酸信號對于維持大腦的生理功能非常重要，但是同時也是引起神經障礙性疾病的關鍵因素。在腦卒中的發病機制中，NMDA受體參與很多病理變化和生化過程。通過對腦缺血模型的病理研究發現，NMDA受體過度激活引起大量的Ca²⁺內流，細胞內Ca²⁺的瞬間變化會觸發興奮性毒性，并導致蛋白酶、核酸內切酶的激活、一氧化氮(NO)的生成、自由基的產生以及線粒體膜滲透性的改變，從而導致神經元的損傷和死亡，顯然，NMDA受體在缺血性腦損傷中起關鍵作用。因此，NMDA受體已經成為防治腦卒中等神經性疾病藥物研制的重要靶點之一。

大量的臨床前理論研究認為NMDA受體拮抗劑可以治療缺血性腦損傷，如：selfotel、eliprodil、licostinel、lanicemine、UK2240455、SM231900等。但是，所有臨床研究使用的NMDA受體拮抗劑均因療效不確切或嚴重不良反應而被停用。NMDA受體屬配基和電壓雙門控的Ca²⁺離子通道，現已發現并克隆出的NMDA受體亞單位有NR1、NR2(包括NR2A、NR2B、NR2C和NR2D4種)、NR3和NR4亞單位。NR1在中樞神經系統內廣泛分布，是NMDA受體必需的亞單位；NR2、NR3和NR4則呈特異性分布。NMDA受體在不同腦區可以由不同的亞單位組成，并產生不同的電生理學及藥理學特性。NMDA受體兩種不同的亞單位NR2A和NR2B介導細胞內不同信號通路，對腦源性神經營養因子(BDNF)的表達和細胞外信號調節激酶1/2(ERK1/2)磷酸化的激活有不同的作用。NR2B與PSD95蛋白結合產生一系列神經毒性反應，引起了神經元的死亡或凋亡。PSD-95通過第二個PDZ結構域與NMDA受體的NR2B羧基端的tSXV基序結合，同時也可以與神經元型一氧化氮合酶(nNOS，neuronal?nitric?oxidesynthase)結合，過度激活nNOS，NO的大量釋放，從而引起神經興奮毒性，導致腦卒中等疾病發生。選擇性的NR2B拮抗劑是目前抗腦卒中藥物研究的熱點。有實驗表明，體內基因突變或者體外抑制PSD-95的表達并不影響NMDA受體的活性，PSD-95缺失可以引起NO生成減少，降低NMDA受體過度激活導致的神經興奮毒性。本實驗室的研究還發現，NMDAR/PSD-95/nNOS偶聯通路對神經元再生起抑制作用。因此阻斷該通路的信號傳導可能有利于減輕缺血性損傷，促進腦卒中后神經元的再生，從而改善腦缺血誘導的記憶功能損傷。從治療的角度看，抑制或者突變NMDA受體是不可行的，因為NMDA受體具有廣泛的生理效應，NMDA受體水平的改變將嚴重干擾機體功能。臨床數據也說明NMDA受體拮抗劑是無效，甚至是有害的。但我們可以通過引入藥物解除PSD-95與NMDA受體的偶聯，阻斷該通路的信號傳導，避免不利因素，同時并不影響NMDA受體的其他生理功能。由此，探索NMDA受體/PSD-95解偶聯劑成為我們尋找抗腦卒中等神經疾病藥物的新策略。

NMDA受體介導缺血性腦損傷同時也介導生理狀態下必需的神經興奮，通常的NMDA受體的拮抗在阻斷NMDA受體下游信號傳導的同時，也影響NMDA受體介導的生理狀態下的Ca²⁺內流。近年來，出現了一些針對蛋白相互作用的結合域而設計的小干擾肽，已經解決了這個問題。比如，為了治療缺血性腦損傷的同時不影響的正常生理功能，可以參照NMDA受體與PSD95相互作用的結合域序列，人工合成一段小肽，這些合成的小肽能夠干擾NMDA受體與PSD95相互結合，阻止了NMDA受體介導的一系列神經毒性生理反應。這種針對靶點的干擾肽進一步與跨膜片段如Tat等相連形成的雜合肽，能夠穿透細胞膜，而發揮藥效作用。因此，針對NMDA受體的PSD95結合域的多肽有可能成為一種用于治療腦卒中的重要手段。

(三)發明內容