[發明專利]阻斷NR2B信號通路的多肽類似物及其制備方法和藥物用途

無效

• 申請號: 200710025006.4
• 申請日: 2007-07-09
• 公開（公告）號: CN101134780A
• 公開（公告）日: 2008-03-05
• 發明（設計）人: 朱東亞;徐進署;江君;羅春霞;朱明媚;吳海銀
• 申請（專利權）人: 南京醫科大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C07K14/155;A61K38/16;A61P25/00
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1.一種制作能跨過細胞膜的干擾膜受體與下游分子結合的多肽類似物的方法，其特征在于將跨膜片段置于標記片段的一端，將膜受體的下游分子結合域片段置于標記片段的另一端，形成跨膜片段、標記片段和結合域片段的線性串聯重復多肽分子。

2.一種選擇性阻斷NMDA受體NR2B亞型與下游PSD95分子結合的多膚類似物，該多膚按照權利要求1所述方法制作，將NMDA受體NR2B亞基的羧基端的PSD95結合域多肽置于HIV-1的跨膜片段Tat多肽的一端，中間插入HA標記多肽形成一條串連多肽。其特征在于該多肽類似物能跨過神經細胞摸，選擇性地干擾了NMDA受體NR2B亞型與PSD95分子結合，抑制了NR2B與PSD95結合引起的神經細胞毒性。

3.按照權利要求2所述的多肽，其特征在于NMDA受體的多肽阻斷劑全長氨基酸排列順序是Pro-Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg-Gly-Lys-Leu-Ser-Ser-Ile-Glu-Ser-Asp-Val-Gly-Lys-Leu-Ser-Ser-Ile-Glu-Ser-Asp-Val，其中Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg是HIV調控蛋白的跨膜片段，能攜帶與其共價結合的異源蛋白轉移到細胞內。Lys-Leu-Ser-Ser-Ile-Glu-Ser-Asp-Val是源于流感病毒的血凝素的9個氨基酸組成標記片段，Lys-Leu-Ser-Ser-Ile-Glu-Ser-Asp-Val是NMDA受體NR2B亞單位羰基端的9個氨基酸的多肽，包含NR2B羧基端與PSD-95特異性結合片段。

4.按照權利要求2所述的多肽，其特征在于使用Tat蛋白提高了多肽阻斷劑的細胞通透性。由于Tat蛋白沒有位置的限制性，故Tat連接NR2B9C肽的N-或C-端，都能發揮跨膜功能。

5.一種選擇性阻斷NMDA受體NR2B亞型與PSD95結合的多肽類似物的制備方法，包括用化學合成法和PCR法合成該多肽的編碼序列DNA，將該DNA插入融合表達載體，轉化大腸桿菌，大腸桿菌在精氨酸富集培養基中表達出融合蛋白包含體；包含體經洗滌、溶解、乙醇分級沉淀純化；提純的融合蛋白溶于80mmol/L的鹽酸中進行酸水解釋放NMDA受體NR2B亞型多肽類似物，釋放出的多肽調至pH中性，通過陽離子交換層析柱獲得目的多肽。

6.根據權利要求5所述的精氨酸富集培養基，其特征在于是一種生產NMDA受體NR2B亞型多肽類似物的高效培養基。精氨酸富集培養基的組成成分為：

蛋白胨(Trypton)??????????????0.5％-1.5％

酵母提取物(Yeast?extract)????0.1％-1％

NaCl?????????????????????????0.5％-1.5％

精氨酸???????????????????????0.05-0.5％

7.根據權利要求5所述NMDA受體NR2B亞型多肽類似物，其特征在于能特異性的與PSD-95的結合，使得NR2B與PSD-95解偶聯，阻斷引起神經興奮性毒性的下游信號的傳導。能夠治療缺血性腦損傷及其它以神經元死亡或凋亡為特征的神經系統疾病。

8.根據權利要求5所述NMDA受體NR2B亞型多肽類似物，其特征在于既能以凍干粉針劑、注射劑的制劑形式單獨使用，也能與藥物載體組合制成藥物組合物，這些藥物載體包括：多元醇類、糖類和無機鹽類。