[發(fā)明專利]一種準確簡便的蓑羽鶴性別鑒定方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 200710024387.4 | 申請日： | 2007-06-18 |
| 公開（公告）號： | CN101086013A | 公開（公告）日： | 2007-12-12 |
| 發(fā)明（設計）人： | 陳國宏;張紅霞;包文斌;吳信生;徐琪;胡飛;孫志明;束婧婷;程金花;陳同海;王金美;劉鑫;吳云良;陳清;謝飛 | 申請（專利權）人： | 揚州大學 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 揚州市錦江專利事務所 | 代理人： | 江平 |
| 地址： | 225009*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 準確 簡便 蓑羽鶴 性別 鑒定 方法 | ||
1、一種準確簡便的蓑羽鶴性別鑒定方法，其特征在于先通過兩對引物組合對蓑羽鶴基因組DNA的W、Z染色體上的特異序列進行擴增，再經(jīng)1.5％瓊脂糖凝膠電泳，用Gene?Genius凝膠成像儀進行拍照記錄，根據(jù)帶型判斷性別：雌性為兩條帶，雄性為一條帶；
所述兩對引物組合為：EE1(5’-ACAGTTTGTCTGTCTCCGGGGAA/AGCTGGAYTTCAGWSCATCTTCT-3’)、EE2(5’-TAGGCTGCAGAATACAGCAT/TTGTGCAGTTCTAGTCCATA-3’)和EE3(5’-CACCCTGGATTGGACAACCTATTTC/TCAGAGCACTCTTTCCAGGAA-3’)、EE4(5’-AAGCATAGAAACAATGTGGGAC/AACTCTGTCTGGAAGGACTT-3’)。
2、根據(jù)權利要求1所述準確簡便的蓑羽鶴性別鑒定方法，其特征在于在對蓑羽鶴基因組DNA的W、Z染色體上的特異序列進行擴增時，采用10μL體系：取0.5?U?Taq?DNA聚合酶、1.5mM?MgCl2、200μM?dNTP、4pmol引物和100ng蓑羽鶴基因組DNA，加雙蒸水補至10μL。
3、根據(jù)權利要求1所述準確簡便的蓑羽鶴性別鑒定方法，其特征在于蓑羽鶴基因組DNA的提取方法是：取抗凝血30μL于1.5mL離心管中，加入300μL裂解液，裂解24小時后，加入6μL蛋白酶K和2μL?Rnase，55℃水浴10～15小時后，分別加等體積的飽和酚、苯酚-氯仿-異戊醇混合液和氯仿-異戊醇混合液各抽提一次，留上清，加冰無水乙醇沉淀DNA，70％酒精洗滌，干燥，TE溶解，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>
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