[發(fā)明專利]一種谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶激活蛋白酶抑制因子的分離純化方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710023721.4
• 申請日: 2007-07-06
• 公開（公告）號: CN101121747A
• 公開（公告）日: 2008-02-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳堅(jiān);吳敬;堵國成;張東旭
• 申請（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號: C07K14/81
• 分類號: C07K14/81;C07K1/36;C07K1/16
• 代理公司: 無錫市大為專利商標(biāo)事務(wù)所
• 代理人: 時旭丹;劉品超

1.一種谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶激活蛋白酶抑制因子的分離純化方法，其特征是工藝步驟為：

(1)乙醇沉淀

將吸水鏈霉菌(Streptomyces?hygroscopicus)WSH?03-13的發(fā)酵液離心去除菌體后，加入乙醇至終濃度為70％，緩慢攪拌使之完全溶解，并于4℃靜置10-20min，10000rpm冷凍離心15-30min，收集蛋白沉淀，將沉淀復(fù)溶于適量pH5.0的HAc-NaAc緩沖液中，制成上樣液；

(2)陽離子交換色譜

采用Fractogel?EMD?SO₃^-陽離子交換柱以pH?5.0的HAc-NaAc緩沖液平衡，將1個柱體積的上樣液以0.5-1mL/min的速度加入Fractogel?EMD?SO₃^-陽離子交換柱中，用pH5.0的含0-1M?NaCl梯度的HAc-NaAc緩沖液以同樣的速度洗脫至280nm紫外吸收峰為0，谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶激活蛋白酶抑制因子的活性部分在梯度洗脫時的第一個出峰，收集活性峰；

(3)疏水色譜

陽離子交換柱上獲得的活性部分用pH?7.0的Tris-HCl緩沖液平衡過夜，Phenyl?Sepharose?6?Fast?Flow疏水柱以10個柱體積含有10％NaCl的pH?7.0的Tris-HCl緩沖液平衡，將1個柱體積的上樣液以0.5-1mL/min的速度加入Phenyl?Sepharose?6Fast?Flow疏水柱中，用pH?7.0的Tris-HCl緩沖液以同樣的速度洗脫至280nm紫外吸收峰為0，再以一個柱體積的去離子水洗脫，收集活性峰，即為所制備的電泳純谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶激活蛋白酶抑制因子溶液。