[發明專利]D－乳酸診斷/測定試劑盒及D－乳酸濃度測定方法

無效

• 申請號: 200710023230.X
• 申請日: 2007-06-13
• 公開（公告）號: CN101324561A
• 公開（公告）日: 2008-12-17
• 發明（設計）人: 王爾中
• 申請（專利權）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50;G01N21/31;C12Q1/26;C12Q1/00
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• 代理人: 暫無信息

1.一種具有D-乳酸特異性的酶循環擴增法、酶比色法及酶聯法技術的D-乳酸濃度測定方法，其方法原理如下：

D-乳酸+2高鐵細胞色素c?D-乳酸脫氫酶丙酮酸+

?????????????????????????????????????2亞鐵細胞色素c

丙酮酸+氨離子+還原型輔酶丙氨酸脫氫酶L-丙氨酸

?????????????????????????????????????+水+輔酶

丙氨酸+水+氧甘氨酸氧化酶氨離子+丙酮酸+

?????????????????????????????????????過氧化氫

過氧化氫+還原型色原體組合過氧化物酶吲嗒胺色原或

?????????????????????????????????????醌亞胺色原+水

將最終反應物置于可見光分析儀下，檢測400-700nm處直接反映吲嗒胺色原或醌亞胺色原含量高低的光吸收速度/程度，得出D-乳酸濃度大小測定結果。

2.一種D-乳酸診斷/測定試劑盒，主要成分包括：

緩沖液????????????20-500mmol/L

穩定劑????????????1-4000mmol/L

還原型輔酶????????0.1-0.35mmol/L

2高鐵細胞色素c????1-50mmol/L

氨離子????????????1-50mmol/L

D-乳酸脫氫酶??????1000-80000U/L

丙氨酸脫氫酶??????1000-80000U/L

甘氨酸氧化酶??????1000-80000U/L

過氧化物酶????????500-80000U/L

還原型色原體組合??0.1-20mmol/L

其特征在于：試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

3.根據權利要求2所述D-乳酸診斷/測定試劑盒，其特征在于：

由緩沖液、穩定劑、還原型輔酶、2高鐵細胞色素c、氨離子、D-乳酸脫氫酶、丙氨酸脫氫酶、甘氨酸氧化酶、過氧化物酶、還原型色原體組合組成單劑試劑。

4.根據權利要求2所述D-乳酸診斷/測定試劑盒，其特征在于：

由緩沖液、穩定劑、還原型輔酶、2高鐵細胞色素c、氨離子、D-乳酸脫氫酶、丙氨酸脫氫酶、甘氨酸氧化酶、過氧化物酶、還原型色原體組合組成雙劑試劑；試劑1，由緩沖液、穩定劑、還原型輔酶、2高鐵細胞色素c、氨離子、還原型色原體組合組成；試劑2，由緩沖液、穩定劑、D-乳酸脫氫酶、丙氨酸脫氫酶、甘氨酸氧化酶、過氧化物酶、還原型色原體組合組成。過氧化物酶、還原型色原體組合、還原型輔酶、2高鐵細胞色素c、氨離子、D-乳酸脫氫酶、丙氨酸脫氫酶、甘氨酸氧化酶在試劑1或試劑2中的位置可以不限。

5.根據權利要求2所述D-乳酸診斷/測定試劑盒，其特征在于：

由緩沖液、穩定劑、還原型輔酶、2高鐵細胞色素c、氨離子、D-乳酸脫氫酶、丙氨酸脫氫酶、甘氨酸氧化酶、過氧化物酶、還原型色原體組合組成多劑試劑；試劑1，由緩沖液、穩定劑、還原型輔酶、2高鐵細胞色素c、氨離子、還原型色原體組合組成；試劑2，由緩沖液、穩定劑、丙氨酸脫氫酶、甘氨酸氧化酶、過氧化物酶、還原型色原體組合組成；試劑3，由緩沖液、穩定劑、D-乳酸脫氫酶組成。過氧化物酶、還原型色原體組合還原型輔酶、2高鐵細胞色素c、氨離子、D-乳酸脫氫酶、丙氨酸脫氫酶、甘氨酸氧化酶在試劑1、試劑2或試劑3中的位置可以不限。

6.根據權利要求2所述D-乳酸診斷/測定試劑盒，其特征在于：還包括穩定劑1-4000mmol/L或0.1％-100％體積比。所述穩定劑為：硫酸銨(Ammonia?Sulfate)、甘油(Glycerol)、丙二醇(Propylene?Glycol)、乙二醇(Ethylene?glycol)及防腐劑中的至少一種。

7.根據權利要求2所述D-乳酸診斷/測定試劑盒，其特征在于：所述還原型色原體組合可以是下列28個組合中的任一個配對組合：

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

石碳酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

N-乙基-N-(3-硫丙基)-m-噻啶胺

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

N，N-雙乙基-m-甲苯胺

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

2，4-雙氯石碳酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

2，4，6-仨溴-3-羥基-苯磺酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

3，5-雙氯石碳酸磺酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

3，5-雙氯-2-羥基-苯磺酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺鈉鹽

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

仨溴羥基苯甲酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

雙甲基苯胺

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

2，2’-AZINO-雙(3-乙基苯噻唑-6-磺酸)

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

4-羥基-3-甲氧基苯甲酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

3-甲基-乙基-羥基苯胺

4-氨基抗砒

石碳酸

4-氨基抗砒

N-乙基-N-(3-硫丙基)-m-噻啶胺

4-氨基抗砒

N，N-雙乙基-m-甲苯胺

4-氨基抗砒

2，4-雙氯石碳酸

4-氨基抗砒

2，4，6-仨溴-3-羥基-苯磺酸

4-氨基抗砒

3，5-雙氯石碳酸磺酸

4-氨基抗砒

3，5-雙氯-2-羥基-苯磺酸

4-氨基抗砒

N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺鈉鹽

4-氨基抗砒

仨溴羥基苯甲酸

4-氨基抗砒

雙甲基苯胺

4-氨基抗砒

N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺

4-氨基抗砒

2，2’-AZINO-雙(3-乙基苯噻唑-6-磺酸)

4-氨基抗砒

4-羥基-3-甲氧基苯甲酸

4-氨基抗砒

3-甲基-乙基-羥基苯胺