[發明專利]一種硝西泮人工抗原的制備方法

無效

• 申請號: 200710022543.3
• 申請日: 2007-05-11
• 公開（公告）號: CN101071133A
• 公開（公告）日: 2007-11-14
• 發明（設計）人: 胥傳來;李秋生;彭池方;周亞南;陶冠軍;秦昉;徐一平
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: G01N33/531
• 分類號: G01N33/531;G01N33/53;G01N33/558;G01N21/79
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所
• 代理人: 時旭丹;劉品超

1.?一種硝西泮人工抗原的制備方法，其特征是以硝西泮為原料，利用鐵粉還原法使硝西泮苯環上的硝基還原為胺基，制備人工半抗原；再利用重氮化法對半抗原上的胺基進行重氮化并使之與牛血清蛋白結合，制備硝西泮的人工抗原即硝西泮-牛血清蛋白；步驟為：

1)人工半抗原的制備：稱取9mmol還原鐵粉于50ml圓底燒瓶中，加入10ml水、3mmol氯化銨，水浴中加熱15min；另稱取硝西泮3mmol，用一定量的甲醇溶解后，分3次加入上述的反應液中，回流反應4～6h，趁熱過濾鐵粉，將濾液進行減壓蒸餾，得到的殘留用少量熱甲醇溶液溶解，低溫析出沉淀，過濾，干燥得到2mmol半抗原1，3-二氫-7-胺基-5-苯基-2H-1，4-苯并二氮卓-2-酮備用；

反應終點監測：采用薄層層析法進行監測，硅膠薄板下端1cm處作一水平線，吸取反應液1μl點于線上，點樣結束后吹干，將薄板放入層析缸中，層析液為乙酸乙酯-正己烷混合溶劑，乙酸乙酯/正己烷體積比為1:1，展開至薄板3/4處，取板，吹干溶劑；將薄板置于紫外分析儀中，在254nm波長觀察，在Rf為0.25處觀察到顯色點作為反應終點；

2)人工抗原的制備：

制備A液：稱取0.?1mmol半抗原于20ml燒杯中，加入10ml二甲基甲酰胺、1ml水和1ml的1N鹽酸，形成深紅色溶液，冷卻至2℃；然后逐步滴加1M亞硝酸鈉溶液，用淀粉碘化鉀試紙監測，直到試紙變藍停止滴加，低溫下攪拌1h，此液為A液；

制備B液：稱取400mg的牛血清蛋白溶于15ml的pH9.0硼酸鹽緩沖液，低溫保存，此液為B液；

在低溫攪拌下，將A液逐滴地滴加到B液中，并用1N的氫氧化鈉溶液調節pH，使pH保持在9；在4℃條件下攪拌保存過夜，得人工抗原混合液；

將人工抗原混合液移入透析袋中，用2×2L的0.05M的碳酸氫鈉溶液和2×2L的去離子水透析4-6天，使用凍干法將透析袋中的液體制成粉末，即得到人工抗原：硝西泮-牛血清蛋白。