[發(fā)明專利]番茄灰霉病拮抗菌株B－04－glu有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 200710014340.X | 申請(qǐng)日： | 2007-04-16 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN101289649A | 公開（公告）日： | 2008-10-22 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 馬匯泉;李桂霞 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 山東理工大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C12N1/21 | 分類號(hào)： | C12N1/21;C12N15/56;A01N63/02;A01P3/00;C12R1/085 |
| 代理公司： | 淄博科信專利商標(biāo)代理有限公司 | 代理人： | 吳紅 |
| 地址： | 255086山東省淄博市*** | 國(guó)省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 番茄 灰霉病 拮抗 菌株 04 glu | ||
1.一種番茄灰霉病拮抗菌株B-04-glu，其特征在于通過(guò)下述步驟制備得到：
步驟1：將高效拮抗灰霉病的蠟樣芽孢桿菌(Bacillus?cereus)，B-04單個(gè)細(xì)菌菌 落接種到LB培養(yǎng)基中，于26～32℃搖床劇烈振蕩培養(yǎng)6～20h，然后將生成的菌懸液與LB 培養(yǎng)基按1∶10的比例接種，再于26～32℃搖床劇烈振蕩培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期2～3.5h；
步驟2：將步驟1最終獲得的菌液先冰浴20～40min，然后離心收集菌體，將收集的 菌體依次用預(yù)冷的超純水洗至少1～3次，用濃度為1mM、pH為7.0的Hepes洗1～3次， 用濃度為1mM的Hepes、含甘油10％且pH為7.0的電擊緩沖液洗1～3次，然后懸浮到 1.0～2.0ml電擊緩沖液中，分裝成每管100μl，儲(chǔ)藏于-70℃的冰箱中；
步驟3：電擊轉(zhuǎn)化時(shí)取一管菌液放在冰上溶解，溶解后加入5～10μl質(zhì)粒DNA，質(zhì)粒 DNA為β-1，3-葡聚糖酶基因與質(zhì)粒連接產(chǎn)物，冰上放置2～10min后轉(zhuǎn)移到電擊轉(zhuǎn)化杯中， 電擊條件為800～1800V、電容25～50uF、電阻100～400Ω、電擊杯內(nèi)徑2mm，電擊后將 其菌液加入到500μl～1.5ml?LB培養(yǎng)基中，在37℃培養(yǎng)0.5～2h后，取100μl菌液涂在 含有相應(yīng)抗生素的平板上，于26～32℃培養(yǎng)6～24h，即獲得拮抗菌株B-04-glu。
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