[發明專利]SEC2超抗原基因工程肽及其編碼基因和異源表達方法無效

申請號：	200710011177.1	申請日：	2007-04-30
公開（公告）號：	CN101298474A	公開（公告）日：	2008-11-05
發明（設計）人：	張成剛;王小剛;張惠文;陳艷;徐明愷;常迪;蘇振成	申請（專利權）人：	沈陽科健生物技術有限公司
主分類號：	C07K14/31	分類號：	C07K14/31;C12N15/31
代理公司：	沈陽科苑專利商標代理有限公司	代理人：	許宗富
地址：	110016遼***	國省代碼：	遼寧;21
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摘要：
搜索關鍵詞：	sec2 抗原基因工程及其編碼基因表達方法
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及基因工程肽的基因克隆和異源表達，具體說是一系列具有SEC2超抗原活性的基因工程肽、及其編碼基因的制備和異源表達。

背景技術

超抗原(superantigen，SAg)是一組由細菌或病毒編碼的蛋白質分子，可以極低濃度(1～10ng/mL)刺激大部分T細胞增生，具有超強的增強機體免疫反應功能和一定的抗腫瘤活性。因此，超抗原是一種極好的免疫調節劑和增效劑，可望被開發成潛在的新型抗腫瘤藥物，用于腫瘤治療。

金黃色葡萄球菌腸毒素(Staphylococcal?enterotoxins，SEs)是一類具有代表性的微生物外毒素。由于其極強的T細胞激活功能，成為一類典型微生物超抗原，受到人們的廣泛重視。近年來，人們在對金黃色葡萄球菌腸毒素(SE)結構、免疫學功能及其抗腫瘤等進行了大量研究工作，其中主要集中在對SEA/SEB等的研究方面。我所在世界上首次對SEC2的基因進行了克隆、測序并在靶向融合蛋白研究方面取得了開創性成果，為進一步開展腸毒素C2(SEC2)分子改造及其靶向融合蛋白的研發奠定了基礎。

實驗腫瘤學研究顯示利用SEC2作為腫瘤治療的超抗原藥物具有其它藥物不可比擬的優點：SEC2較能抗消化并且耐熱以及只需使用很小的劑量就可引發T細胞應答和明顯的腫瘤抑制效應。盡管如此，在臨床使用過程中還不完全盡如人意。1)作為潛在腸胃毒素可引起伴隨著嘔吐和嚴重腹瀉等毒副作用；2)SEC2超抗原對腫瘤細胞作用位點缺乏靶向性，在增強機體免疫功能抑制腫瘤細胞生長的同時，可能對人體正常細胞產生細胞毒作用；劑量過大或應用不當亦可產生免疫耐受；3)作為潛在的臨床開發藥物，超抗原SEC2分子量過大(約為27.6kD)，不易于靜脈注射和人體吸收。這些問題限制了其在臨床上的應用。因此，如何避免不利義素因素，充分利用其強大的免疫功能，對于探索SEC2在抗腫瘤、甚至抗病毒中的作用，具有非常重要的意義。

針對超抗原SEC2實際臨床應用中所面臨的毒性效應、缺乏靶向性以及分子量偏大等問題，本發明根據金黃色葡萄球菌基因組、生物信息學等理論，利用現代分子生物學技術實現SEC2蛋白分子的定向改造，以獲得一系列具有超抗原活性的基因工程多肽，這種經遺傳改造的超抗原基因工程肽對于擴大其臨床應用范圍，改善療效、降低毒副作用具有重要的實踐意義，具有潛在的開發應用前景。

發明內容

本發明涉及SEC2超抗原基因工程肽及其編碼基因和異源表達方法，其為一系列具有超抗原活性的基因工程肽，利用本發明可以在人工控制的條件下，大量獲得高純度的具有超抗原活性的基因工程肽。

為實現上述目的，本發明的技術方案如下：

SEC2超抗原基因工程肽分別為下列任意氨基酸序列之一，

SEC2-1具有序列表SEQ?ID?NO：2中氨基酸序列；

SEC2-2具有序列表SEQ?ID?NO：4中氨基酸序列；

SEC2-3具有序列表SEQ?ID?NO：6中氨基酸序列；

SEC2-4具有序列表SEQ?ID?NO：8中氨基酸序列；

SEC2-5具有序列表SEQ?ID?NO：10中氨基酸序列；

SEC2-6具有序列表SEQ?ID?NO：12中氨基酸序列；

SEC2-7具有序列表SEQ?ID?NO：14中氨基酸序列；

SEC2-8具有序列表SEQ?ID?NO：16中氨基酸序列；