[發明專利]一種檢測土壤硝酸還原酶活性的分析方法

無效

• 申請號: 200710010680.5
• 申請日: 2007-03-21
• 公開（公告）號: CN101271060A
• 公開（公告）日: 2008-09-24
• 發明（設計）人: 武志杰;雋英華;陳利軍;史云峰
• 申請（專利權）人: 中國科學院沈陽應用生態研究所
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N1/28;C12Q1/26
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司
• 代理人: 馬馳;周秀梅

1.?一種檢測土壤中硝酸還原酶活性的分析方法，其特征在于：

1)稱取0.5-1g過0.5-1.5mm篩的土壤風干樣品n份分別裝入n支試管中，n≥2，向試管中分別加入1-3mL?0.5-1mM/L的2，4-二硝基酚溶液，混勻；然后向其中n-1支試管中加入1-1.5mL重量濃度0.05-0.15％的底物KNO₃溶液，另1支試管中加入等量的蒸餾水作為樣本對照；再向試管中分別加入1-2mL重量濃度0.5％-1％的葡萄糖溶液作為氫的供體，再用蒸餾水補充至5-10mL，搖勻，塞上不透氣的橡膠塞后29-31℃恒溫培養24h；同時作試劑空白對照；

2)培養結束后，用10-40mL蒸餾水將試管內的土液混合物完全轉移至100mL的三角瓶中，再用蒸餾水補充至50-100mL；

3)加入鋁鉀礬飽和溶液1-2mL，振蕩，過濾；

4)取濾液1mL于50mL容量瓶中，加入1-3mL蒸餾水和4-8mL顯色劑(相對于亞硝酸根離子過量)，然后用蒸餾水定容至刻度。15分鐘后，在520nm下用分光光度計比色測定吸光值A；

5)在520nm下比色測定一系列已知濃度的亞硝酸根標準溶液的吸收值A’，以亞硝酸根的濃度和測定的吸光值A’制作工作標準曲線，得到斜率b；

6)根據吸光值A和斜率b，計算所測定溶液中亞硝酸根的濃度S，S＝A*b；

7)計算樣品中亞硝酸根含量；

8)計算硝酸還原酶活性：

計算公式為：[(S₁-S₂)*50*V₁/1000*V₂]/W.T＝mgNO₂-N/g土.24h

式中：S₁為樣品中的NO₂-N的含量(mg/L)；S₂為樣品對照中的NO₂-N的含量(mg/L)；50為定容的溶液體積(mL)；V₁為提取液總體積(mL)；V₂為吸取濾液的體積(mL)；W為稱土樣重(g)；T為培養土樣的時間(h)；1000為單位轉化系數。

2.?根據權利要求1所述的分析方法，其特征在于：對于酸性土樣品，分析前應調解其pH為7-8.5，可采用加入碳酸鈣的方法調解，每支試管中分別加入15-25mgCaCO₃，混勻后再向試管中分別加入1-3mL?0.5-1mM/L的2，4-二硝基酚溶液，混勻。

3.?根據權利要求1所述的分析方法，其特征在于：厭氧培養所使用的蒸餾水，使用前，需將其加熱至沸騰驅除水中的O₂，然后封閉冷卻至室溫。

4.?根據權利要求1所述的分析方法，其特征在于：所述顯色劑為重量濃度35％的醋酸配制的重量濃度0.1％的α-萘胺溶液和重量濃度0.5％的對氨基苯磺酸溶液等體積的混合液，而它們的加入相對于亞硝酸根為過量的。