[發明專利]壇紫菜種質鑒定的指紋圖譜的構建方法及其應用

無效

• 申請號: 200710009323.7
• 申請日: 2007-08-03
• 公開（公告）號: CN101126746A
• 公開（公告）日: 2008-02-20
• 發明（設計）人: 陳昌生;謝潮添;紀德華;徐燕
• 申請（專利權）人: 集美大學
• 主分類號: G01N30/00
• 分類號: G01N30/00;G01N1/28;C12Q1/68
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務所
• 代理人: 馬應森

1.壇紫菜種質鑒定的指紋圖譜的構建方法，其特征在于包括以下步驟：

1)收集壇紫菜樣品；

2)各樣品基因組DNA的提取與純化；

3)PCR擴增：利用所提取的基因組DNA作為模板，以經過優化的實驗體系進行SRAP分子標記分析；

4)選擇具有代表性的SRAP多態性條帶用于構建各供試樣品的DNA指紋圖譜；

5)將構建的DNA指紋圖譜轉化成為計算機可以識別的數碼指紋，并輸入指紋圖譜識別軟件中，建立壇紫菜種質的數碼指紋庫，用于后續的壇紫菜種質鑒定；

6)壇紫菜種質的自動化鑒定。

2.如權利要求1所述的壇紫菜種質鑒定的指紋圖譜的構建方法，其特征在于所述的壇紫菜樣品為收集生產或科學研究上具有代表性的壇紫菜品系。

3.如權利要求1所述的壇紫菜種質鑒定的指紋圖譜的構建方法，其特征在于各樣品基因組DNA的提取是取新鮮的藻體材料，用消毒海水處理后，在勻漿機中勻漿，后加入酶液，30℃保溫0.5～2h，酶解結束后用無菌水稀釋酶解物，篩絹過濾，濾液經3000～8000r/min，10℃離心5～10min，收集細胞，用無菌水懸浮洗滌細胞一次，離心后重新收集細胞，并收集的細胞轉入5ml離心管中用CTAB法提取基因組DNA。

4.如權利要求3所述的壇紫菜種質鑒定的指紋圖譜的構建方法，其特征在于酶液的組成為2％海螺酶，2mol/l葡萄糖。

5.如權利要求1所述的壇紫菜種質鑒定的指紋圖譜的構建方法，其特征在于PCR反應體系為25μL的反應體系中含2.5μL?10×PCR?Buffer，5ng模板DNA，2.5mmol/L?Mg²⁺，1.0UDNA聚合酶，200nmol/L引物，200μmol/L?dNTP。

6.如權利要求1所述的壇紫菜種質鑒定的指紋圖譜的構建方法，其特征在于擴增程序為95℃預變性5min；94℃1min，35℃1min，72℃2min，5個循環；94℃1min，48℃1min，72℃2min，35個循環；72℃延伸10min。

7.如權利要求1所述的壇紫菜種質鑒定的指紋圖譜的構建方法，其特征在于PCR擴增的引物對序列為表2中正向引物及反向引物隨機組合的1對或多對引物。

表2?PCR擴增所采用的引物編號及其序列

正向引物??編號????序列(5’-3’)反向引物??編號????序列(5’-3’)??ME?1??ME?2??ME?3??ME?4??ME?5??ME?6??ME?7??ME?8??ME?9??ME?10??TAGGTCCAAACCGGATA??TAGGTCCAAACCGGAGC??TAGGTCCAAACCGGAAT??TAGGTCCAAACCGGACC??TAGGTCCAAACCGGAAG??TGAGTCCAAACCGGACA??TGAGTCCAAACCGGACG??TGAGTCCAAACCGGACT??TGAGTCCAAACCGGAGG??TGAGTCCAAACCGGAAA??EM?1??EM?2??EM?3??EM?4??EM?5??EM?6??EM?7??EM?8??EM?9??EM?10??GACTGCGTACGAATTCAA??GACTGCGTACGAATTCTG??GACTGCGTACGAATTCGA??GACTGCGTACGAATTAAT??GACTGCGTACGAATTTGC??GACTGCGTACGAATTCCA??GACTGCGTACGAATTGAC??GACTGCGTACGAATTTGA??GACTGCGTACGAATTAAC??GACTGCGTACGAATTGCA