[發(fā)明專利]抗氧化及預防糖尿病發(fā)生的融合蛋白的制備方法及其應用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710009084.5
• 申請日: 2007-06-08
• 公開（公告）號: CN101096385A
• 公開（公告）日: 2008-01-02
• 發(fā)明（設計）人: 周克夫;李俊燕
• 申請（專利權）人: 廈門大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/09;C12N1/21;A61K38/16;A61P3/10
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務所
• 代理人: 馬應森

技術領域

本發(fā)明涉及一種融合蛋白，尤其是涉及一種抗氧化及預防糖尿病發(fā)生的融合蛋白的制備方法及其應用。

背景技術

胸腺素原α(prothymosinα)是一個小的酸性蛋白，相對分子質(zhì)量13,000，最初由大鼠的胸腺分離得到。雖然胸腺素是由胸腺分泌的，但在體內(nèi)許多組織都有胸腺素原α的表達，而且是不含內(nèi)含子的一種保守的DNA序列。胸腺肽的臨床應用始于20世紀70年代中期，其最主要的貢獻是對胸腺依賴性疾病的治療，它對于維持原發(fā)性免疫缺陷病，自身免疫疾病和癌癥患者的免疫反應性，刺激其特異性淋巴細胞的活性起著主要作用，因此廣泛應用于治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡、白塞氏綜合征、類風濕性關節(jié)炎、重癥感染、支氣管哮喘、急慢性肝炎和腫瘤等疾病。另外，由于人類的老化明顯地反映胸腺組織的萎縮和功能的衰竭，胸腺肽可以推遲一些老年性疾病的出現(xiàn)，因此應用胸腺肽抗衰老也有著極其廣闊的前景。

隨著研究的深入，人們已經(jīng)將研究重點轉(zhuǎn)向胸腺素中的單一肽，以期發(fā)現(xiàn)更有效的臨床治療藥物。文獻表明，胸腺素α原(prothymosinα，ProTα)和Tα1是當前胸腺素研究中的熱點。

胸腺素原α的前28個肽(Thymosinα1，Tα1)已有許多實驗證明它是一種免疫激素，1984年，Haritos(Haritos?A?A?et?al.Proc?Natl?Acad?Sci.USA，1984，81：1008)等從大鼠胸腺分離出一種含有111個氨基酸殘基的多肽，其N端含已發(fā)現(xiàn)的所有胸腺素α，原家族成員的序列，因此命名為胸腺素α原，ProTα是一個小分子蛋白，由109~113個氨基酸殘基組成。由111個氨基酸殘基組成。人ProTα由109個氨基酸殘基組成，它對提高機體免疫力，抗機會感染，促進淋巴細胞的成熟與分化；對IL-2和IL-2R的表達有一定的促進作用；甚至于發(fā)現(xiàn)它對腫瘤也有一定治療作用。

1986年Pan和Haritos(Pan?et?al.Arch?Biochem?Biophys?1986；Haritos?et?al.Proc?NatlAcad?Sci?USA?1986)等發(fā)現(xiàn)大鼠ProTA能增強小鼠抗白色念珠菌(Cαndidαα1bicαns)感染的能力，后來又發(fā)現(xiàn)ProTα能刺激轉(zhuǎn)移抑制因子(MIF)的釋放，其作用比Tα1強10～20倍。

I型糖尿病的重要原因與自身免疫疾病密切相關，其中主要是因為胰島β細胞受到自身免疫細胞的攻擊，造成抗原暴露，引起免疫系統(tǒng)進一步的反應，使得胰島β細胞大量損失，正常胰島素的分泌受到影響，血糖升高，形成糖尿病癥狀。STZ在I型糖尿病模型制備中已經(jīng)得到廣泛應用，大鼠在50mg/kg一次性注射情況下并可以造模成功，而小鼠則在相同劑量經(jīng)過5次連續(xù)注射后基本達到造模目的，目前認為STZ的作用機理是通過使機體產(chǎn)生過量的NO，攻擊破壞胰島β細胞，引起胰島細胞抗原暴露，激活機體免疫機制，大量巨噬細胞進入胰島細胞從而加劇胰島細胞的損傷，最后造成胰島素分泌減少，引起血糖增高，誘發(fā)糖尿病。誘導的小鼠胸腺萎縮，腎臟明顯腫大，并且血清抗氧化能力顯著下降。

近年來，糖尿病的病因和發(fā)病機理研究表明氧化應激與糖尿病的發(fā)生和發(fā)展密切相關(曹文彬等，抗氧化微量營養(yǎng)素防治糖尿病的研究進展，長春中醫(yī)藥大學學報，2006，22(2)：73-74)，為了防止糖尿病的發(fā)生發(fā)展，人們對一些具有防治糖尿病作用的天然抗氧化物進行了系統(tǒng)的研究，發(fā)現(xiàn)它們通過表達不同的機制與作用環(huán)節(jié)打斷氧化侵襲引致胰島β細胞損害的惡性循環(huán)，從而為天然抗氧化治療糖尿病提供了一個新的策略。