[發明專利]包含血管抑素或其片段的復合物、其制備方法及應用

有效

• 申請號: 200710004558.7
• 申請日: 2007-01-10
• 公開（公告）號: CN101219219A
• 公開（公告）日: 2008-07-16
• 發明（設計）人: 羅永章;常國棟;楊恕玲;高磊
• 申請（專利權）人: 北京普羅吉生物科技發展有限公司
• 主分類號: A61K47/48
• 分類號: A61K47/48;A61K38/46;A61K38/17;A61K9/00;A61K9/127;A61K9/16;A61K9/50;A61P35/00
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司
• 代理人: 林曉紅

技術領域

本發明涉及含有血管抑素或其片段，優選片段K1-3的復合物和緩釋制劑及其制備方法。本發明涉及的復合物無毒副作用、具有更高的生物活性以及更好的代謝穩定性。本發明還提供含有這種復合物和緩釋制劑的藥物組合物以及含有這種復合物的試劑盒。本發明還提供使用本發明中的復合物、緩釋制劑、藥物組合和試劑盒來預防、診斷、治療腫瘤、制備抗腫瘤藥物以及抗新生血管疾病的方法。

背景技術

癌癥是當今世界的常見病以及多發病，是威脅人類生命的頭號殺手。因此抗癌藥物的開發以及研制一直是國內外的熱門課題。目前臨床上常用的抗癌藥物多為傳統的化療藥物，長期使用易導致耐藥性以及對人體也有很大的毒副作用，在臨床應用上受到很大的限制。

1971年，Folkman提出腫瘤的生長和遷移依賴于新生血管生成理論，新生血管生成是指在原有血管上生成新的毛細血管。因此，阻斷腫瘤新生血管生成就可能阻止腫瘤的生長和轉移。將腫瘤中的新生血管內皮細胞作為癌癥治療的靶點，為治療腫瘤提供了一種治療方式，即抗血管生成治療(Folkman?J.N?Engl?J?Med?1971；285：1182-1186)。

血管抑素(Angiostatin)是1994年O’Reilly等在Lewis肺癌荷瘤小鼠的血清和尿液中提取的內源性血管生成抑制劑。它是小鼠血纖溶酶原(Plasminogen)N端從第98位氨基酸殘基(以起始氨基酸殘基Met為第一位氨基酸)起始的一段序列(O’Reilly?MS，Holmgren?L，Shing?Y，et?al.Cell，1994，79：315-328)，它至少包括血纖溶酶原5個Kringles結構中的前4個，每個Kringle結構由80個左右氨基酸殘基組成(Lerch?P?G，Riskli?E?E，Lergier?W，et?al.Eur?J?Biochem，1980，107：7-13)。

研究發現重組人纖溶酶原的K1、K2、K3、K5、K1-3、K2-3、K1-5等都能有效抑制牛毛細血管內皮細胞(bovine?capillaryendothelial?cell，BCE)細胞增殖，而K4幾乎無此活性。K1-3抑制細胞增殖的活性明顯強于最初發現的血管抑素K1-4(Cao?Y，Ji?RW，Davidson?D，et?al.J?Biol?Chem，1996，271(46)：29461-29467.)。研究進一步發現K1-3能抑制小鼠Lewis肺癌生長及轉移作用，也能抑制小鼠Lewis肺癌原發瘤及小鼠血管內皮瘤等在內的多種原發瘤的生長。血管抑素發揮活性的機理在于它通過抑制血管內皮細胞的增殖，從而抑制了腫瘤組織新生血管的生成，從而切斷提供腫瘤組織營養和氧氣的運輸通路，最后餓死腫瘤。O’Reilly指出，血管抑素是內源性纖溶酶原內部的一個片斷，它特異性的作用于增生的血管內皮細胞，因此一般不會引起免疫反應，長期注射也不出現體重減輕、活動減少、食欲下降及條件致病菌的感染等副作用(Sim?BKL，O’Reilly?MS，et?al.Cancer?Res，1997，57：1329-1334.)，同時也不會影響肝、腎的功能(Kirsch?M，Strasser?J，Allende?R，et?al.J?Biol?Chem，1996，271(46)：29461-29467)。相比之下，目前市場上大部分的化療藥物，主要是針對腫瘤細胞，但是腫瘤細胞具有遺傳的不穩定性以及高的突變率，故而極易產生耐藥性，影響藥效。鑒于以上原因，血管抑素在腫瘤細胞的治療上已經取得很明顯的療效，有望成為二十一世紀的主打抗癌藥物。

然而，盡管包括血管抑素在內的多肽和蛋白質類藥物相比于化學藥物具有毒副作用小，以及不產生耐藥性等優點，并且為了盡可能的提高蛋白藥物的生物利用度以及減少其在體內的降解，通常采用靜脈給藥方式，但是對于分子量小的蛋白來說，靜脈給藥的體內半衰期很短。體內的蛋白降解只是其中一方面的原因，另一個重要的方面是，小分子蛋白能夠通過腎過濾的途徑很快的被消除。

研究發現，血液中水力半徑超過白蛋白或是分子量大于約66,000道爾頓(66kDa)的蛋白，通常可以穩定的保留在循環系統中。但是小分子卻會通過腎小球過濾很快的被消除。所以，為維持小分子量蛋白在血液中的有效治療濃度，需要進行頻繁的注射或點滴。這種治療方式雖然能達到治療的目的，但是卻給病人帶來了嚴重的不便與痛苦，提高了用藥成本，對某些藥物長期的使用還有可能產生一些副作用，例如免疫反應。