[發(fā)明專利]EB病毒相關(guān)癌癥的早期診斷方法及各自的試劑和試劑盒

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200680056919.6
• 申請(qǐng)日: 2006-12-21
• 公開（公告）號(hào): CN101617056A
• 公開（公告）日: 2009-12-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 胡立夫
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 伊諾基因卡爾生物技術(shù)私人有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12Q1/70;C12N15/38;G01N33/48
• 代理公司: 北京市中咨律師事務(wù)所
• 代理人: 黃革生;史文靜

發(fā)明領(lǐng)域

[0001]本發(fā)明涉及診斷與受試者中EB病毒(Epstein-Barr?virus)感染相關(guān)的癌癥的方法。發(fā)明利用了對(duì)一些分子生物標(biāo)志的基因負(fù)荷(geneload)和基因表達(dá)譜(gene?expression?profiling)的確定，所述分子生物標(biāo)志與EB病毒相關(guān)癌癥相關(guān)。發(fā)明還涉及用于實(shí)施發(fā)明方法的試劑和試劑盒。

發(fā)明背景

[0002]EB病毒(EBV)是嗜淋巴細(xì)胞的人皰疹病毒，可以建立終身潛伏。在兒童時(shí)期，EBV感染通常是無(wú)癥狀的。然而，在青少年和成人中，EBV初次感染可導(dǎo)致自限性淋巴組織增生病、感染性單核細(xì)胞增多癥(IM)。在EBV初次感染后，病毒存在于器官中，并終身通過唾液分泌。此外，在每10000個(gè)人外周B細(xì)胞中，約有1個(gè)潛伏存在所述病毒。在罕見的情況下，EBV感染可以導(dǎo)致所謂的X-連鎖淋巴細(xì)胞增生綜合征(XLP-綜合征)或Duncan綜合征，其與X染色體上的基因缺陷相關(guān)。

[0003]EBV在世界范圍流行，約95％的成人群體對(duì)EBV為血清陽(yáng)性。潛伏存在病毒的B細(xì)胞具有在細(xì)胞培養(yǎng)中發(fā)展成永生化細(xì)胞的能力，而這些細(xì)胞不受調(diào)控的增殖在體內(nèi)通常受功能性細(xì)胞免疫的抑制。然而，在免疫抑制患者中，例如經(jīng)歷器官移植的患者，或感染HIV的患者，EBV感染的B細(xì)胞可以不受控制的增殖，從而導(dǎo)致B細(xì)胞淋巴瘤。

[0004]由于該刺激細(xì)胞增殖和使感染細(xì)胞永生化的性質(zhì)，所述病毒與多種人類惡性病強(qiáng)烈相關(guān)，特征是高滴度的抗EBV抗體譜，和增加的循環(huán)EBV?DNA水平。除上述在免疫抑制患者中的B細(xì)胞淋巴瘤外，EBV還與伯基特(Burkitt)淋巴瘤、鼻咽癌(NPC)和唾液腺癌強(qiáng)相關(guān)，還與霍奇金(Hodgkin)淋巴瘤、T-細(xì)胞淋巴瘤和胃腺癌較低程度的相關(guān)。然而，尚未完全闡述清楚EBV在上述惡性腫瘤的病因?qū)W中扮演的特定角色。

[0005]鼻咽癌(NPC)表現(xiàn)出世界范圍內(nèi)非常不均勻的地理分布。NPC是格林蘭島第二常見的腫瘤(31例/10⁵居民/年)，是中國(guó)南部(app.42例/10⁵居民/年)和東南亞，包括新加坡、香港、越南和印度尼西亞最常見的腫瘤。在北非也屬常見，但是在其它國(guó)家則相對(duì)稀少(瑞典0.6例/10⁵居民/年)。這一顯著的、不均勻的癌癥分布強(qiáng)烈地提示了，除了與EB病毒(EBV)證據(jù)充分的相關(guān)性以外，環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)因子對(duì)遺傳易感群體的作用。

[0006]示例性的病因?qū)W因子可包括生活方式，例如對(duì)咸魚和一些草藥中亞硝胺類的消費(fèi)，和遺傳因素，包括可遺傳的，換言之，體細(xì)胞和外遺傳改變。

[0007]在印度尼西亞，具有2.25億人口的人種差異群體，NPC是最常見的耳-鼻-喉(ENT)腫瘤，在當(dāng)?shù)胤N群中具有高流行性，年度全面檢驗(yàn)估算為6.2/100,000居民。目前，生活在蘇拉威西島上的當(dāng)?shù)胤N群證明了示例性的高發(fā)病率。在爪哇島中部的日惹(Yogyakarta)，NPC是男性中最流行的腫瘤，是女性中第4流行的腫瘤，男性/女性比為2.4，分別構(gòu)成兩性中所有確診惡性腫瘤的22％和8％。

[0008]在未分化NPC、發(fā)育不良性障礙、原位癌和轉(zhuǎn)移組織的所有樣本中，都可以檢測(cè)到EBV?DNA、RNA和蛋白質(zhì)。已知在該腫瘤中表達(dá)6種EBV基因。在NPC中表達(dá)的一種此類蛋白質(zhì)——LMP1，可以在體外轉(zhuǎn)化已建系的嚙齒類成纖維細(xì)胞和人上皮細(xì)胞(Wang等人，1985；Hu等人，1993)，因此被歸類為癌基因。來自74例NPC的臨床和隨訪數(shù)據(jù)顯示，LMP1陽(yáng)性的NPC比LMP1陰性的腫瘤生長(zhǎng)更快，擴(kuò)張更快(Hu等人，1995)。此外，顯示所有的高等級(jí)發(fā)育不良性上皮障礙和侵襲性NPC中都存在EBV感染，而來自胎兒或正常成人的任何正常表皮中都不存在。

[0009]伯基特淋巴瘤在赤道非洲和新幾內(nèi)亞的約7至9歲兒童中具有高地方性發(fā)病率。約98％的這類地方性伯基特淋巴瘤在轉(zhuǎn)化細(xì)胞中表現(xiàn)出EB病毒。在伯基特淋巴瘤的散發(fā)形態(tài)(主要出現(xiàn)在成人中)中，約25％的病例與EBV相關(guān)。

[0010]在上述所有的EBV相關(guān)疾病和癌癥中，都可以驗(yàn)證病毒蛋白EBNA1的存在。發(fā)現(xiàn)EBNA1是對(duì)在細(xì)胞核中長(zhǎng)期維持病毒基因組具有重要意義的DNA結(jié)合蛋白。