[發明專利]EB病毒相關癌癥的早期診斷方法及各自的試劑和試劑盒

無效

• 申請號: 200680056919.6
• 申請日: 2006-12-21
• 公開（公告）號: CN101617056A
• 公開（公告）日: 2009-12-30
• 發明（設計）人: 胡立夫
• 申請（專利權）人: 伊諾基因卡爾生物技術私人有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/70;C12N15/38;G01N33/48
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所
• 代理人: 黃革生;史文靜

1.診斷受試者中EB病毒相關癌癥的方法，其包括：

(a)從所述受試者收集生物學樣品；

(b)通過確定EBNA1基因負荷，以及至少一個選自EB病毒基因LMP1和細胞基因RASSF1A、CHFR和DAP的基因的表達水平，來確定所述生物學樣品中EB病毒基因負荷的量；和

(c)將確定的所述生物學樣品中的所述基因的表達水平和參照比較。

2、權利要求1的方法，其還包括在b)前，從所述生物學樣品中分離和純化DNA。

3、權利要求2的方法，其中分離和純化的DNA是基因組DNA。

4、根據權利要求1-3的任一項的方法，其中通過確定至少一個選自EB病毒基因LMP1和細胞基因RASSF1A、CHFR和DAP中的基因的外遺傳狀態，來確定表達水平。

5、根據權利要求4的方法，其中外遺傳狀態是甲基化狀態。

6、根據權利要求5的方法，其中甲基化狀態是通過甲基化特異性PCR(MSP)來確定的。

7、根據權利要求6的方法，其中甲基化特異性PCR是多重甲基化特異性PCR(MMSP)。

8、根據權利要求1-7的任一項的方法，其還包括確定EBNA1的基因負荷，以及LMP1和RASSF1A的表達水平。

9、根據權利要求8的方法，其還包括確定CHFR和/或DAP的表達水平。

10、根據權利要求1-9的任一項的方法，其還包括確定對照基因的表達水平，作為樣品DNA質量的對照。

11、根據權利要求10的方法，其中將持家基因用作為對照基因。

12、根據權利要求11的方法，其中使用肌動蛋白和/或甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)作為對照基因。

13、根據權利要求1-12的任一項的方法，其中EB病毒相關癌癥選自B細胞和T細胞淋巴瘤，其包括伯基特淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤，與免疫抑制相關的淋巴瘤，和致死性中線肉芽腫；癌癥，其包括鼻咽癌(NPC)、唾液腺癌、和胃腺癌；以及肉瘤，其包括平滑肌肉瘤。

14、根據權利要求1-13的任一項的方法，其中c)中的參照是正常組織。

15、根據權利要求1-14的任一項的方法，其中，確定EBNA1的基因負荷包括使用至少兩種寡核苷酸引物，其中，第一種引物包括SEQ?ID?NO：1或SEQ?ID?NO：3中提出的核苷酸序列，或其變體、互補序列和片段，第二種引物包括SEQ?ID?NO：2或SEQ?ID?NO：4中提出的核苷酸序列，或其變體、互補序列和片段。

16、根據權利要求1-15的任一項的方法，其中確定LMP1的表達水平包括利用至少兩種寡核苷酸引物，其中，第一種引物包括SEQ?ID?NO：5或SEQ?ID?NO：7中提出的核苷酸序列，或其變體、互補序列和片段，第二種引物包括SEQ?ID?NO：6或SEQ?ID?NO：8中提出的核苷酸序列，或其變體、互補序列和片段。

17、根據權利要求1-16的任一項的方法，其中確定RASSF1A的表達水平包括利用至少兩種寡核苷酸引物，其中，第一種引物包括SEQ?ID?NO：9或SEQ?ID?NO：11中提出的核苷酸序列，或其變體、互補序列和片段，第二種引物包括SEQ?ID?NO：10或SEQ?ID?NO：12中提出的核苷酸序列，或其變體、互補序列和片段。

18、根據權利要求1-17的任一項的方法，其中確定CHFR的表達水平包括利用至少兩種寡核苷酸引物，其中，第一種引物包括SEQ?ID?NO：13或SEQ?ID?NO：15中提出的核苷酸序列，或其變體、互補序列和片段，第二種引物包括SEQ?ID?NO：14或SEQ?ID?NO：16中提出的核苷酸序列，或其變體、互補序列和片段。