[發明專利]在酵母表達系統中增強重組外源蛋白的分泌效率的方法有效
| 申請號： | 200680055047.1 | 申請日： | 2006-06-20 |
| 公開（公告）號： | CN101473035A | 公開（公告）日： | 2009-07-01 |
| 發明（設計）人： | 林瀅權;金圣根 | 申請（專利權）人： | 財團法人牧巖生命工學研究所 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10;C12N15/04;C12N9/38 |
| 代理公司： | 永新專利商標代理有限公司 | 代理人： | 林曉紅 |
| 地址： | 韓國*** | 國省代碼： | 韓國;KR |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 酵母 表達 系統 增強 重組 蛋白 分泌 效率 方法 | ||
1.一種提高外源蛋白的分泌效率的方法，其包括步驟：
(a)用重組外源基因構建體轉化酵母宿主，所述構建體包含半乳糖誘導 型啟動子、分泌信號序列和編碼外源蛋白的基因，以構建轉化酵母菌株； 和
(b)在所述半乳糖誘導型啟動子的活性受到調控的條件下培養所述轉 化酵母菌株，其中通過降低半乳糖從培養基進入所述轉化酵母菌株的轉運 速率對所述半乳糖誘導型啟動子活性進行調控；所述半乳糖誘導型啟動子 的活性受到調控的條件是在培養時向所述培養基共添加半乳糖和葡萄糖， 其中所述半乳糖和葡萄糖的比例在4∶1至1∶1的范圍內；且所述培養通過分 批補料培養進行。
2.根據權利要求1所述的方法，其中通過將重組外源基因構建體插入 所述酵母宿主的染色體或者通過將所述重組外源基因構建體以環狀載體的 形式引入所述酵母宿主的細胞質，進行步驟(a)的所述轉化。
3.根據權利要求1所述的方法，其中所述半乳糖誘導型啟動子是SEQ ID?NO：1所示的GAL1啟動子、SEQ?ID?NO：2所示的GAL10啟動子、或 SEQ?ID?NO：3所示的GAL7啟動子。
4.根據權利要求1所述的方法，其中通過使所述轉化酵母的半乳糖通 透酶基因缺陷或部分破壞從而使其成為非功能性的來降低半乳糖從培養基 進入所述轉化酵母菌株的轉運速率。
5.根據權利要求1所述的方法，其中所述酵母宿主用重組外源基因構 建體轉化，所述重組外源基因構建體含有在半乳糖誘導型啟動子的調控下 表達的蛋白質二硫鍵異構酶編碼基因。
6.根據權利要求1所述的方法，進一步在步驟(a)和(b)之間包括步驟 (a-1)：用含有在半乳糖誘導型啟動子的調控下表達的蛋白質二硫鍵異構酶 編碼基因的重組外源基因構建體進一步轉化步驟(a)的轉化酵母菌株。
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