[發明專利]制備κ-角叉菜聚糖酶的方法

有效

• 申請號: 200680054085.5
• 申請日: 2006-08-29
• 公開（公告）號: CN101415722A
• 公開（公告）日: 2009-04-22
• 發明（設計）人: 雅斯閔·納杰姆丁·克哈姆布哈提;卡爾帕納·哈瑞西·莫迪;布哈瓦納斯·杰哈
• 申請（專利權）人: 科學和工業研究委員會
• 主分類號: C07K1/34
• 分類號: C07K1/34;C07K14/21;C12N9/42
• 代理公司: 中原信達知識產權代理有限責任公司
• 代理人: 楊 青;樊衛民

1.用于制備κ-角叉菜聚糖酶的方法，其中所述方法包括下列步驟：

(i)將登記號為MTCC?5261的耐鹽海洋細菌假單胞菌 (Pseudomonas?sp.)在30℃培養于液體培養基中28小時以獲得培養物， 所述培養基含有0.003g.100ml^-1角叉菜聚糖、0.01g.100ml^-1酵母提取物、 0.3g.100ml^-1氯化鈉、0.04g.100ml^-1K₂HPO₄和0.003g.100ml^-1KH₂PO₄， pH6.3；

(ii)將從步驟(i)獲得的培養物在8000rpm離心15分鐘，獲得作為 上清液的無細胞提取液；

(iii)從步驟(ii)獲得的上清液中純化粗酶，是通過用50％硫酸銨在 4℃的溫度下處理上清液，將混合物老化24小時的一段時間，然后在 4℃下以8000rpm離心，得到含有κ-角叉菜聚糖酶的沉淀；

(iv)將從步驟(iii)獲得的沉淀懸浮在10mM?Tris-HCl緩沖溶液中； 和

(v)將在步驟(iv)中獲得的懸浮液透析以除去附著的硫酸銨，然后 通過凝膠過濾得到所需的純化κ-角叉菜聚糖酶。

2.用于制備κ-角叉菜聚糖酶的方法，其中所述方法包括下列步驟：

(i)將登記號為MTCC?5261的耐鹽海洋細菌假單胞菌 (Pseudomonas?sp.)在30℃培養于液體培養基中28小時以獲得培養物， 所述培養基含有0.03g.100ml^-1角叉菜聚糖、0.01g.100ml^-1酵母提取物、 0.3g.100ml^-1氯化鈉、0.004g.100ml^-1K₂HPO₄和0.03g.100ml^-1KH₂PO₄， pH8.4；

(ii)將從步驟(i)獲得的培養物在8000rpm離心15分鐘，獲得作為 上清液的無細胞提取液；

(iii)從步驟(ii)獲得的上清液中純化粗酶，是通過用40％硫酸銨在 4℃的溫度下處理上清液，將混合物老化24小時的一段時間，然后在 4℃下以8000rpm離心，得到含有κ-角叉菜聚糖酶的沉淀；

(iv)將從步驟(iii)獲得的沉淀懸浮在15mM?Tris-HCl緩沖溶液中； 和

(v)將在步驟(iv)中獲得的懸浮液透析以除去附著的硫酸銨，然后 通過凝膠過濾得到所需的純化κ-角叉菜聚糖酶。

3.用于制備κ-角叉菜聚糖酶的方法，其中所述方法包括下列步驟：

(i)將登記號為MTCC?5261的耐鹽海洋細菌假單胞菌 (Pseudomonas?sp.)在35℃培養于液體培養基中28小時以獲得培養物， 所述培養基含有0.03g.100ml^-1角叉菜聚糖、0.1g.100ml^-1酵母提取物、 0.3g.100ml^-1氯化鈉、0.004g.100ml^-1K₂HPO₄和0.003g.100ml^-1KH₂PO₄， pH5.1；

(ii)將從步驟(i)獲得的培養物在8000rpm離心15分鐘，獲得作為 上清液的無細胞提取液；

(iii)從步驟(ii)獲得的上清液中純化粗酶，是通過用55％硫酸銨在 4℃的溫度下處理上清液，將混合物老化24小時的一段時間，然后在 4℃下以8000rpm離心，得到含有κ-角叉菜聚糖酶的沉淀；

(iv)將從步驟(iii)獲得的沉淀懸浮在20mM?Tris-HCl緩沖溶液中； 和

(v)將在步驟(iv)中獲得的懸浮液透析以除去附著的硫酸銨，然后 通過凝膠過濾得到所需的純化κ-角叉菜聚糖酶。