[發(fā)明專(zhuān)利]用于檢測(cè)真菌毒素的設(shè)備和方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200680053201.1
• 申請(qǐng)日: 2006-12-13
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101384896A
• 公開(kāi)（公告）日: 2009-03-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: J·伯梅斯特;I·多恩;U·拉比;I·豪瑟－哈恩
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 拜爾技術(shù)服務(wù)有限責(zé)任公司;拜爾農(nóng)作物科學(xué)股份公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N21/77
• 分類(lèi)號(hào): G01N21/77;G01N33/569;G01N33/543
• 代理公司: 中國(guó)專(zhuān)利代理(香港)有限公司
• 代理人: 溫宏艷;林 森

本發(fā)明涉及用于檢測(cè)真菌毒素的設(shè)備和方法并涉及適于實(shí)施所述 方法的試劑盒。

真菌毒素的檢測(cè)包括很多領(lǐng)域的應(yīng)用，例如用于食品和飼料方面， 用于環(huán)境分析，用于農(nóng)作物保護(hù)和用于生化研究。

真菌毒素是真菌產(chǎn)生的有毒物質(zhì)，它們具有非常不同的化學(xué)結(jié)構(gòu)。 真菌毒素在諸如谷物、含油種子和水果的收獲產(chǎn)物中被找到，而且可導(dǎo) 致人和動(dòng)物中毒。到現(xiàn)在已有超過(guò)300種不同的真菌毒素被鑒定出來(lái)， 其被分成約25種結(jié)構(gòu)類(lèi)型并表現(xiàn)出不同的毒性作用。根據(jù)毒素類(lèi)型， 真菌毒素可導(dǎo)致急性或慢性中毒。真菌毒素的常規(guī)種類(lèi)有黃曲霉毒素、 赭曲毒素、麥角生物堿、棒曲霉素和鐮刀霉毒素。鐮刀霉毒素中特別重 要的有脫氧瓜萎鐮菌醇、玉米赤霉烯酮、瓜萎鐮菌醇、T-2-/HT2-毒素和 伏馬菌素，因?yàn)樗鼈兘?jīng)常在谷物產(chǎn)品中被發(fā)現(xiàn)。因此，在谷倉(cāng)、谷物貿(mào) 易和谷物加工部分(例如磨坊、麥芽坊、飼料生產(chǎn)商、農(nóng)場(chǎng)、咨詢(xún)中心、 大學(xué)或政府部門(mén)，例如為了保證食品質(zhì)量的消費(fèi)者保護(hù)部門(mén))中應(yīng)當(dāng)實(shí) 現(xiàn)針對(duì)真菌毒素的測(cè)試，例如針對(duì)田間真菌毒素(例如鐮刀霉毒素)或 針對(duì)貯藏真菌毒素的測(cè)試。

現(xiàn)有技術(shù)中已經(jīng)公開(kāi)了用于檢測(cè)真菌毒素的許多方法。例如通過(guò)色 譜方法(如HPLC)，其可與基于熒光的吸收或質(zhì)譜檢測(cè)聯(lián)用，來(lái)檢測(cè) 真菌毒素。例如，HPLC分析谷物樣品前，通常通過(guò)免疫親和柱濃縮并 純化分析物。所有基于HPLC的方法都投資額高、樣品處理相對(duì)復(fù)雜和 時(shí)間分析長(zhǎng)的缺點(diǎn)。由于所述缺點(diǎn)，基于HPLC的檢測(cè)方法不適于快速、 廉價(jià)并簡(jiǎn)單地分析諸如生產(chǎn)、存放、貿(mào)易或加工的谷物中的谷物樣品。 代之以在專(zhuān)門(mén)的分析實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行基于HPLC的分析。結(jié)果，在實(shí)踐中， 只能延遲幾天得到結(jié)果。

檢測(cè)真菌毒素的備選方法是ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測(cè)試)技術(shù)。在 微滴定板上進(jìn)行ELISA，微滴定板的孔用諸如特異性結(jié)合真菌毒素的捕 獲抗體涂覆。ELISA測(cè)試的缺點(diǎn)是有許多移液、洗滌和溫育步驟，這會(huì) 使分析時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)，超過(guò)30分鐘。這限制了該測(cè)試在分析實(shí)驗(yàn)室之 外的地點(diǎn)快速進(jìn)行。而且，該測(cè)試不能同時(shí)檢測(cè)多種分析物，因?yàn)槊總€(gè) 微滴定板上通常只涂覆以一種抗體。

檢測(cè)真菌毒素的另一種方法是側(cè)向流動(dòng)測(cè)試(LFA)。通過(guò)LFA可檢 測(cè)真菌毒素，例如在硝化纖維條上進(jìn)行直接競(jìng)爭(zhēng)性免疫測(cè)試，其中通過(guò) 毛細(xì)管力使要分析的樣品經(jīng)過(guò)整個(gè)硝化纖維條。不利的是，該方法僅能 進(jìn)行定性真菌毒素檢測(cè)。該測(cè)試的另一個(gè)缺點(diǎn)是每種真菌毒素需要單獨(dú) 的條。

現(xiàn)有技術(shù)還包括開(kāi)發(fā)用于檢測(cè)真菌毒素的方法的研究，例如M.M. Ngundi等，Anal.Chem.2005，77，148-154所述的。該方法包括通過(guò) 將赭曲毒素A固定在玻璃載片上來(lái)實(shí)現(xiàn)檢測(cè)赭曲毒素A的間接競(jìng)爭(zhēng)性 免疫測(cè)試。熒光標(biāo)記的赭曲毒素A抗體和要確定的樣品的混合物上樣 于玻璃載片上，在通過(guò)洗滌去除未結(jié)合的抗體后對(duì)其讀數(shù)。不利的是， 該方法需要洗滌步驟和10至20分鐘的溫育時(shí)間，還需要復(fù)雜的熒光成 像系統(tǒng)來(lái)讀出結(jié)果。結(jié)果，在此基礎(chǔ)上不可能開(kāi)發(fā)出能在分析實(shí)驗(yàn)室外 的地點(diǎn)上進(jìn)行的快速測(cè)試。

因此，由于要復(fù)雜的讀數(shù)設(shè)備，現(xiàn)有技術(shù)已知的檢測(cè)真菌毒素的方 法需要巨大投資額，包括許多手工步驟或不能在分析實(shí)驗(yàn)室以外使用。

因此，本發(fā)明的目的是提供克服至少一個(gè)上述現(xiàn)有技術(shù)缺點(diǎn)的方 法，尤其是能以快速、廉價(jià)和容易實(shí)現(xiàn)的方式在樣品中檢測(cè)真菌毒素的 方法。

該目的通過(guò)用于快速檢測(cè)真菌毒素的方法實(shí)現(xiàn)，其包括以下步驟:

a)提供薄膜波導(dǎo)，其包括在第二光透明層(b)上的第一光透明波導(dǎo) 層(a)，其中(b)具有比(a)低的折射率，特異性和/或親和性結(jié)合配偶體作 為真菌毒素和/或結(jié)合配偶體的化學(xué)或生化識(shí)別元件以空間分離的方式 固定在該薄膜波導(dǎo)上，

b)將含一種或多種真菌毒素的樣品和結(jié)合配偶體施加于所述薄膜 波導(dǎo)上固定的結(jié)合配偶體上，

c)檢測(cè)由薄膜波導(dǎo)上固定的結(jié)合配偶體與樣品中的真菌毒素和/或 與結(jié)合配偶體的相互作用產(chǎn)生的消逝場(chǎng)中的信號(hào)，

d)確定樣品中存在的一種或多種真菌毒素的量。

本發(fā)明的另一主題在于用于實(shí)施檢測(cè)真菌毒素的方法的設(shè)備。

進(jìn)一步的主題是適于實(shí)施用于檢測(cè)真菌毒素的方法的試劑盒。

本發(fā)明其他有益的實(shí)施方案來(lái)源于從屬權(quán)利要求。