[發(fā)明專利]由單克隆抗體產(chǎn)生的凋亡增強

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200680052923.5
• 申請日: 2006-12-15
• 公開（公告）號: CN101375160A
• 公開（公告）日: 2009-02-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 納塔莉·富涅爾;克里斯托夫·德羅默夫
• 申請（專利權(quán)）人: LFB生物科技公司
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;C12Q1/00;A61K39/395;A61P21/00;A61P7/04;A61P9/00;C07K16/28;A61P37/00
• 代理公司: 北京中譽威圣知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 叢芳;彭曉玲

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及海藻糖含量低于65％的抗體組合物用于體外凋亡誘導(dǎo)的用途。

背景技術(shù)

抗體不僅越來越多地應(yīng)用于研究中，它們也形成了用于診斷和治療方法的理想工具，其中它們?yōu)槌Ｒ?guī)的治療提供了另一種選擇。

許多具有治療用途的血漿或單克隆來源抗體目前已經(jīng)上市或者正處于臨床開發(fā)。它們的特性被用來獲得能夠特異性結(jié)合其靶物和能夠有效招募免疫效應(yīng)細(xì)胞并由此通過這些細(xì)胞的細(xì)胞毒性功能導(dǎo)致靶細(xì)胞被破壞的治療工具。

然而，在一些比如慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)這樣的病理學(xué)中，觀察到患者具有有缺陷的免疫效應(yīng)細(xì)胞(尤其是NK細(xì)胞)活性，這可能是導(dǎo)致這些患者中次級病理學(xué)發(fā)生率提高的原因(Ziegler等人，1981)。而且，當(dāng)用抗-CD20單克隆抗體Rituxan治療這些患者的CLL時，該治療似乎功效很小，這可能部分歸因于其NK細(xì)胞的低ADCC活性(Farag?2003)。

在紅斑狼瘡患者患者(Green?2005)、擴張性心肌病患者(Anderson1982)、嗜血細(xì)胞性組織細(xì)胞增生癥(穿孔素缺陷——Clementi?R，2005)和HIV-感染患者(穿孔素和酶缺陷——Portales，2003)中也發(fā)現(xiàn)了NK細(xì)胞缺陷。因此由于與前述的相似性，對于CLL患者來說令人害怕的是，采用常規(guī)的單克隆抗體治療將具有極少或沒有效果。

因此本申請人嘗試提供其活性不依賴于免疫效應(yīng)細(xì)胞細(xì)胞毒性功能且由此能夠施用于具有減弱的免疫效應(yīng)細(xì)胞活性的患者的工具。

在文獻(xiàn)WO?01/77181中，申請人證明了選擇可用于產(chǎn)生具有經(jīng)由FcgammaRIII受體(CD16)的強ADCC活性的抗體的細(xì)胞系的重要性。其中顯示，對比如YB2/0這樣的大鼠淋巴瘤細(xì)胞系中產(chǎn)生的抗體Fc區(qū)的改良糖基化會導(dǎo)致ADCC活性提高。所述抗體組合物的聚糖結(jié)構(gòu)賦予抗體組合物低巖藻糖基化。

申請人驚奇的發(fā)現(xiàn)所述抗體組合物，除了其強細(xì)胞毒性活性外，其表面表達(dá)CD16的細(xì)胞的存在下誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，而CH0中產(chǎn)生的相同抗體則具有低得多的引發(fā)凋亡的傾向。

發(fā)明內(nèi)容

因此本發(fā)明涉及其海藻糖含量低于65％的抗體組合物用于體外、離體或體內(nèi)誘導(dǎo)凋亡的用途。

本發(fā)明的第一目的尤其涉及用抗體組合物體外、離體或體內(nèi)誘導(dǎo)靶細(xì)胞凋亡的方法，它包括在表面表達(dá)CD16的細(xì)胞存在下，將抗體組合物與靶細(xì)胞接觸，抗體針對靶細(xì)胞，并且抗體組合物的海藻糖含量低于65％。

抗體由通過二硫鍵結(jié)合在一起的重鏈和輕鏈組成。各鏈由位于N-末端位置特異于抗體所針對的抗原的可變區(qū)(或結(jié)構(gòu)域)以及位于C-末端位置的恒定區(qū)組成，所述恒定區(qū)由輕鏈的一個CL結(jié)構(gòu)域和重鏈的數(shù)個結(jié)構(gòu)域(CH₁、CH₂和CH₃)組成。可變區(qū)與重鏈和輕鏈的CH₁和CL結(jié)構(gòu)域的結(jié)合構(gòu)成抗體的Fab片段，其通過一個能夠使各Fab與靶抗原結(jié)合的非常靈活的鉸鏈區(qū)與Fc區(qū)連接。介導(dǎo)抗體的效應(yīng)器特性的Fc區(qū)保持能夠與比如FcγR受體(FcgammaR)這樣的效應(yīng)器分子接近。由兩個球形結(jié)構(gòu)域CH₂和CH₃組成的Fc區(qū)在CH₂結(jié)構(gòu)域處被糖基化，兩條鏈上都存在有結(jié)合于精氨酸297(Asn?297)的雙觸角(bi-antenna)N-聚糖。

所述N-聚糖為以下通式，其上可添加其它糖類(顯示形式：“G0”)：

因此，在本發(fā)明的抗體組合物中，“海藻糖”意指由這些N-寡糖攜帶的海藻糖。海藻糖分子，當(dāng)其存在時，結(jié)合于N-寡糖的N-酰基葡糖胺(GlcNAc)，該GlcNAc本身結(jié)合于Asn?297。

由各抗體的兩條重鏈任一攜帶的各N-聚糖可能或者可能不攜帶海藻糖分子。因此根據(jù)其N-聚糖是否不攜帶海藻糖、僅其N-聚糖中的一個攜帶一個海藻糖分子、或其兩個2N-聚糖各攜帶一個海藻糖分子，各抗體可能含有0、1或2個海藻糖分子。

因此，“其海藻糖含量低于65％的抗體組合物”意指這樣的抗體組合物，其中在由組合物中的抗體的各糖基化位點所攜帶的所有聚糖結(jié)構(gòu)中，低于65％含有海藻糖分子。

有利的是，所述聚糖結(jié)構(gòu)更特別地選自下述形式：

因此，有利地，在由本發(fā)明組合物中的抗體的各糖基化位點(Asn297)所攜帶的形式G0、G0F、G1和G1F的聚糖結(jié)構(gòu)中，海藻糖含量低于65％。