[發明專利]用于調節止血的組合物和方法

有效

• 申請號: 200680050779.1
• 申請日: 2006-11-15
• 公開（公告）號: CN101356192A
• 公開（公告）日: 2009-01-28
• 發明（設計）人: R·M·卡米爾
• 申請（專利權）人: 費城兒童醫院
• 主分類號: C07K14/745
• 分類號: C07K14/745;C07H21/00;A61K38/36
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 劉冬;黃可峻

1.一種調節止血的包含SEQ?ID?NO:?1的氨基酸41-179和氨基酸235-488的因子Xa變異體，其中：

a)?在SEQ?ID?NO:?1的位置235(胰凝乳蛋白酶編號系統中第16位)的Ile被選自Leu、Phe、Asp和Gly的氨基酸取代，

b)?在SEQ?ID?NO:?1的位置236(胰凝乳蛋白酶編號系統中第17位)的Val被選自Leu、Ala和Gly的氨基酸取代，或

c)?在SEQ?ID?NO:?1的位置418(胰凝乳蛋白酶編號系統中第194位)的Asp被Asn或Glu取代，

其中所述因子Xa變異體通過活性位點的底物結合低于野生型因子Xa，并且在所述因子Xa變異體在凝血酶原酶復合物中被因子Va結合時增加，和

其中所述因子Xa變異體具有比野生型因子Xa長的血漿半衰期。

2.根據權利要求1所述的因子Xa變異體，其中所述變異體的氨基酸序列由SEQ?ID?NO:?1的氨基酸41-179和氨基酸235-488組成，其中：

a)在SEQ?ID?NO:?1的位置235(胰凝乳蛋白酶編號系統中第16位)的Ile被選自Leu、Phe、Asp和Gly的氨基酸取代；

b)在SEQ?ID?NO:?1的位置236(胰凝乳蛋白酶編號系統中第17位)的Val被選自Leu、Ala和Gly的氨基酸取代；或，

c)在SEQ?ID?NO:?1的位置418(胰凝乳蛋白酶編號系統中第194位)的Asp被Asn或Glu取代。

3.一種編碼根據權利要求1所述的因子Xa變異體的核酸，所述核酸進一步編碼細胞內裂解位點，其中所述細胞內裂解位點位于SEQ?ID?NO:?1的位置234和235?(胰凝乳蛋白酶編號系統的位置15和16)之間或者代替激活肽。

4.根據權利要求1所述的因子Xa變異體，其中在SEQ?ID?NO:?1的位置235-237?(胰凝乳蛋白酶編號系統的位置16-18)的所述序列選自Leu-Val-Gly、Gly-Val-Gly、Ile-Ala-Gly、Phe-Val-Gly和Ile-Gly-Gly。

5.一種藥用組合物，其在生物相容性載體中包含根據權利要求1所述的因子Xa變異體。

6.一種表達載體，包含權利要求3所述的核酸。

7.根據權利要求6所述的載體，其選自：腺病毒載體、腺病毒相關載體、逆轉錄病毒載體、質粒和慢病毒載體。

8.權利要求1的因子Xa變異體在制備治療止血相關疾病的藥物中的用途。

9.根據權利要求8所述的用途，其中所述變異體是前凝血劑且所述疾病選自：血友病A和B，與抑制抗體相關聯的血友病A和B，凝血因子缺乏癥，維生素K環氧化物還原酶C1缺乏癥，γ羧化酶缺乏癥，與外傷、損傷、血栓形成、血小板減少、中風、凝血病、彌散性血管內凝血(DIC)相關聯的出血，過度抗凝血治療疾病，伯-蘇綜合征，Glanzman血小板無力癥以及貯存池缺損。

10.根據權利要求8所述的用途，其中在SEQ?ID?NO:?1的位置235-237?(胰凝乳蛋白酶編號系統的位置16-18)的所述序列選自Leu-Val-Gly、Gly-Val-Gly、Ile-Ala-Gly、Phe-Val-Gly和Ile-Gly-Gly。

11.根據權利要求1所述的因子Xa變異體，其中SEQ?ID?NO:?1的位置235?(胰凝乳蛋白酶編號系統的第16位)的Ile被選自Leu、Phe、Asp和Gly的氨基酸取代。

12.根據權利要求1所述的因子Xa變異體，其中SEQ?ID?NO:?1的位置236?(胰凝乳蛋白酶編號系統的第17位)的Val被選自Leu、Ala和Gly的氨基酸取代。

13.根據權利要求1所述的因子Xa變異體，其中SEQ?ID?NO:?1的位置418?(胰凝乳蛋白酶編號系統的第194位)的Asp被Asn或Glu取代。

14.根據權利要求1所述的因子Xa變異體，其中SEQ?ID?NO:?1的位置235?(胰凝乳蛋白酶編號系統的第16位)的Ile被Leu取代。