[發明專利]用于調節止血的組合物和方法

有效

• 申請號: 200680050779.1
• 申請日: 2006-11-15
• 公開（公告）號: CN101356192A
• 公開（公告）日: 2009-01-28
• 發明（設計）人: R·M·卡米爾
• 申請（專利權）人: 費城兒童醫院
• 主分類號: C07K14/745
• 分類號: C07K14/745;C07H21/00;A61K38/36
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 劉冬;黃可峻

相關參考

根據35?U.S.C.§119(e)，本申請要求在2005年11月15日提交 的美國臨時申請第60/736,680號的優先權，該申請的全部內容以引用 的方式結合在本文中，其程度如同在本文中全文列出。

依照35?U.S.C，§202(c)，承認美國政府享有本文所述的本發明的 某些權利，美國國家衛生研究院的資助對本發明的完成做出了部分貢 獻，資助項目號PO1HL-74124-01。

技術領域

本發明涉及醫學和血液學的領域。更具體而言，本發明提供一種 新型凝血因子X/Xa藥物和使用該藥物來調節需要該治療的患者中凝 血級聯的方法。

背景技術

說明書通篇引用了若干出版物和專利文獻以便描述本發明所屬 的領域的狀態。這些引用文獻中的每個引用文獻以引用的方式結合在 本文中，如同其在本文中全文列出。

凝血的酶為胰蛋白酶樣酶，胰蛋白酶樣酶屬于具有糜蛋白酶樣折 疊的蛋白酶的S1肽酶家族。凝血蛋白酶含有彼此高度同源且與消化 的祖絲氨酸蛋白酶高度同源的催化域。結構同源性/一致性如此之大 (＞70％)以致凝血酶的催化域中的殘基根據胰凝乳蛋白酶原中的相應 殘基來進行編號。

凝血酶作為無活性前體(酶原)在血液中循環，其需要蛋白水解裂 解來激活。與激活后所產生的絲氨酸蛋白酶相比，酶原具有大約 10,000倍或更小的蛋白水解活性。在血管損傷位點啟動凝血導致一系 列的反應，其中酶原通過特異蛋白水解裂解而轉化成蛋白酶并且形成 用于連續反應的酶。這使血細胞激活，使可溶纖維蛋白原轉化為不可 溶的纖維蛋白，從而形成凝塊。通過與用作“自殺”底物的循環蛋白 酶抑制劑或那些識別活性酶的蛋白酶抑制劑起反應來移除過量蛋白 酶。因此，凝血酶原的蛋白水解激活是凝血級聯的關鍵調節特點。

雖然凝血酶原中的某些在它們各自的激活反應中在兩個或兩個 以上的位點裂解，但形成蛋白酶需要在單個位點裂解。在這個位點的 裂解和其結構結果(structural?consequence)被認為使用基于胰凝乳蛋 白酶原的同源編號系統和利用胰蛋白酶原和胰蛋白酶所進行的廣泛 結構工作是最容易做到的方式。酶原到絲氨酸蛋白酶的轉化需要在 Arg¹⁵(通常為Arg¹⁵與lie¹⁶之間的鍵)后面的裂解，這通常移除激活肽 并暴露始于Ile¹⁶的催化域中的新的N末端。一個實例為因子X到因 子Xa(參看圖1和圖2)的轉化。在胰蛋白酶和因子Xa中，新的N末 端序列始于¹⁶-Val¹⁷-Gly¹⁸-Gly¹⁹。對于其它凝結酶，新的N末端序列 是在同一主題上的變化。然后N末端序列折回到催化域內且以序列 特異性方式插入到N末端結合裂縫內，這被稱作“分子性欲(molecular sexuality)”。參看圖2。因此，具有交替N末端序列的變異體不太可 能以相當的方式經歷分子性欲。N末端插入導致在催化域的內部在 Ile¹⁶的α-NH₂基與Asp¹⁹⁴之間形成鹽橋。鹽橋的形成與催化域結構中 的許多變化相關聯，這些變化包括：所謂的激活域的重新排列(在圖3 中顯示出)；形成催化作用所需的氧陰離子孔和形成底物結合位點。 這些變化導致活性絲氨酸蛋白酶的成熟。新N末端通過分子性欲和 鹽橋形成對活性蛋白酶成熟的序列特異性相互作用的關鍵貢獻通過 以下事實顯而易見：不需要裂解而激活的細菌蛋白酶利用催化域內的 另一側鏈來與Asp¹⁹⁴形成鹽橋；胰蛋白酶原可被激活成蛋白酶樣構 象，無需裂解但是要在非常高的插入到該裂縫內的Ile-Val二肽濃度 的情況下，盡管效率非常低；Val-Ile二肽和其它變異體的效率更低； 此外，存在這樣的細菌蛋白質的兩個實例，這些細菌蛋白質經由提供 插入到該N末端結合裂縫內的它們自身的N末端而破壞激活機制從 而在不存在裂解的情況下激活凝血酶原。